五。嗜热性细菌（芽孢）计数

嗜热性细菌（芽孢）计数

将检样25克加225ml无菌水的溶液或悬浮液迅速煮沸（贮于烧瓶内），并煮沸5min（以杀死细菌繁殖体及耐热性低的芽胞）后，即将烧瓶浸于冷水内。

1.平酸菌计数

  在5只无菌培养皿中各注入2ml上述热处理过的液体，用葡萄糖-胰胨琼脂作倾注平板，凝固后，在50~55度培养48~72h，计算5个平板上菌落的平均数。

平酸菌在上述琼脂平板上的菌落为圆形，直径2~5mm，具不透明的中心及黄色晕，晕很狭，在弱产酸菌菌落周围不存在，或不易观察到。平板从培养箱内取出后应立即进行细菌计数，因为黄色会很快消褪。如在48h培养后酸形成与否不易辨别，则可培养到72h。

2.不产生硫化氢的嗜热性厌氧菌检验

   将上述热处理过的检样液体加入等量新制备的去氧肝汤（总量为20ml）中，以无菌2%琼脂封顶，先加温到50~55度，再在55度中培养72h，当有气体生成（琼脂塞破裂，气味似干酪）时，可以认为有嗜热性厌氧菌存在。

3.产生硫化氢的嗜热性厌氧菌计数

   将上述热处理过的检样液体加入已溶化的亚硫酸盐琼脂中（总量20ml），一式六份。浸试管于冷水内，使培养基固化，继之预加温到50~55度，在55度培养48h。能致硫化物变败的细菌会在亚硫酸盐琼脂管内形成特征性的黑小片。气体不积聚，因为硫化氢可以硫化铁形式被固定。某些嗜热性细菌不生成硫化氢，但代之以生成强大还原性氢，使全部培养基变黑色，计变黑小片数目。

   亚硫酸盐琼脂：胰胨10克，亚硫酸钠1克，琼脂20克，硫乙醇酸钠 5克，5%柠檬酸铁10ml，蒸馏水1000ml，121度高压灭菌20min。自然PH值。

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