无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法
添加:lznyzr 来源: 发布时间:2008-5-21 9:00:54
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无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法
k&H7L Tzv02c:dF*WWc!y;[0 食品伙伴个性空间H|(S\U~#VUt
)YZ Mbn k+Ze01、范围
*nWA d'h-o)zQ([I0食品伙伴个性空间 x2OP6O` Z食品伙伴个性空间%yp]|7R0]p~,}
本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法——生物法。
,C gm Y8x0 本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素(PSP)的测定,其他贝类食品中PSP的测定可参照执行。食品伙伴个性空间7K8dR.|/M'K7{n g
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c { G%N.M(C3o02、原理
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根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间,查出鼠单位,并按小鼠体重,校正鼠单位,计算确定每100g贝肉内的PSP的含量。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒素的总量。食品伙伴个性空间O6YF4qYG8wS4C;Cp
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'r4Z#ulpR-k-H V+^6l;r03、定义
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下列定义适用于本标准。食品伙伴个性空间1w:Lhv)W
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鼠单位 mouse unit,MU食品伙伴个性空间?xSp\9c;O!Y%BR;b
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对体重为20g的小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后,小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量。食品伙伴个性空间:Z_&lf/Aw!z'x
"s2e(B+n!D04、试剂
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4.1 盐酸溶液:0.1mol/L。食品伙伴个性空间%dUc'K7^^,R9n
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3z`$x6QWv04.2 盐酸溶液:5 mol/L。
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4.3 氢氧化钠溶液:0.1 mol/L。
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4.4 麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准溶液:100μg/mL,经酸化,含有20%的乙醇作为保护剂,冷藏保存,无限期稳定。
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5、仪器和设备
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5.1 均质器。
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`Q05.2 天平(感量0.1g)。食品伙伴个性空间zMYl3n
5.3 离心机。食品伙伴个性空间DK*H]x)I%z
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5.4 pH计。食品伙伴个性空间.p?Zvj
5.5 秒表。食品伙伴个性空间'NFf8z$q'\$V,?
'py!IZv7z05.6 玻璃皿:烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等。
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c~8z2faZ05.7 注射器:1mL。
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F1P#OJ*dmU05.8注射器针头:8#。
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5.9 小鼠:体重为19g~21g的健康ICR系雄性小鼠,若体重<19g或>21g,查表C.1的校正系数便可得到实际的死亡时间,体重>23g或已用过的小鼠则不能使用。
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6、ICR系小鼠毒性单位的确定
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]6X9KT$V5S~f06.1 PSP工作标准溶液食品伙伴个性空间8Vg^ z1\yWxs
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](]X3oI5oW._c0 用移液管取100μg/mL Saxitoxin标准液1mL.于100mL容量瓶中,加入用盐酸酸化至pH为3的蒸馏水并定容。该液为lμg/mL Saxitoxin标准液,pH在2.0~4.0之间。在3℃~4℃条件下能稳定数周。食品伙伴个性空间
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C({(u1u06.2 测定用标准溶液食品伙伴个性空间^#ss3lS1G$@ _O
分别用10mL、15mL、20mL、25mL和30mL水稀释10mL浓度为1μg/mL的Saxitoxin标准液,稀释液的pH应为2~4。食品伙伴个性空间[q g%fe;t[Vs
6.3 中值死亡时间的标准液选择食品伙伴个性空间$i-i6g0^N/t|F,g[
-]T]?n"G`06.3.1 将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小鼠数只,选择中值死亡时间为5min~7min的浓度。如某浓度稀释液已达到要求,还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验。
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)g1zWz#h]&X0 例如:用25mL水稀释的10mL标准液在5min~7min杀死小鼠,还需进行24mL+10mL和26mL+10mL的稀释度的试验。食品伙伴个性空间c'cD0QX
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6.3.2 先将小鼠称重(精确到0.5g),以10个小鼠为一组。用中值死亡时间在5min~7min内的各种浓度的标准稀释液两份(最好是三份)注射小鼠,测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需死亡时间。食品伙伴个性空间*r)i&Dr]@1c1D
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6.3.3 记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s,即7s记为5s,8s记为10s(见附录B)。
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3Jp4gQm?h;c|J06.4 毒素转换系数(CF)的计算食品伙伴个性空间V n2NfF
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6.4.1 小鼠中值死亡时间的选择食品伙伴个性空间{W#h*{.{`)E,i
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若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间<5min或>7min则弃去该组结果;若注射另一浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间在5min~7min,即使个别小鼠死亡时间<5min或>7min,也应使用该组的数据。但是若注射某浓度标准稀释液后,10只小鼠中有3只以上存活,则要另取10只小鼠进行重复试验。食品伙伴个性空间R.sB!X6w UcZ#h
6.4.2 校正鼠单位(A)食品伙伴个性空间1m&]g2B$Wo.yQI"n
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j7BAQ4SsF0 根据注射毒素后中值死亡时间为5min~7min的10只小鼠的个别死亡时间,由附录B分别查出鼠单位(M),再由附录C查出小鼠的重量校正因子(是),每毫升标准稀释液的校正鼠单位(A)按公式(1)计算。
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A = k×M ……………………………………… (1)
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式中:
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A — 校正鼠单位(MU);食品伙伴个性空间)~r1rM)S]
食品伙伴个性空间 c(G| d1f6B8R(o
M — 鼠单位(MU);
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