看精华帖笔记

上一篇 / 下一篇 2008-06-13 13:52:36

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笔记的内容大部分是原帖内容，有小部分做了修改和调整，希望对新人和看笔记的人有所帮助，我在此也建议筒子们有时间的话多看看精华帖，收获将是不少！

1、请教：紫外线杀菌灯的有效使用期限（有附件参考！）

答：jogen筒子的解答：

紫外灯一般寿命为3000-4000小时。因紫外线肉眼不能觉察，其照射强度与杀菌效能必须用物理、化学或微生物方法才能测定。可以用UV辐射仪测定，我们一般用微生物法：以经过24小时培养证明无菌的普通琼脂培养基若干个，开盖，在室内空气中暴露10分钟，然后分成两组，一组以被鉴定的UV灯照射5min，距离10-20cm，另一组对照。37℃24h检查菌落数，杀菌率90％以上，可以使用。
使用时应注意
1、经常用酒精棉球擦拭灯管
2、紫外线肉眼看不见，灯管放射的蓝色光线并不代表紫外线强度，可以每次记录使用时间，定期检测效果，以便判断使用期限

2、乳糖发酵管在湿热灭菌后怎么会这样啊？刚刚湿热灭菌完，就看到每个发酵管里就有很大的泡泡，怎么办啊

答：主要是高压灭菌时排气不彻底引起。
要排到热气流稳定才行哦！

3、求助：细菌总数为多少时报告为“多不可计”？
答：应该重新选择稀释级，以保证菌落数在30~300之间
有时最高释稀倍数超过300了有不能重做，则必须计数，结果加“*”做区别，见微生物检验通则

最高稀释度大于300,要考虑加大稀释度
1、实验操作误差，请说明你的操作过程和空白的情况等。
2、稀释度不够，可以做多几个稀释度看看。
3、和样品有关。菌落蔓延如和样品有关系，可以加玻璃珠进去振荡。

4、大家来讨论一下：空气的消毒问题！
答：1．我认为臭氧比紫外好，紫外只能处理表面
2．我还是赞成用紫外线,理由是:
空气中臭氧浓度达0.01-0.02mg/L时即可嗅知：浓度达到1mg/L时，可引起呼吸加速、变、胸闷等症状，在2.5-5mg/L时，可引起脉搏加速，疲倦、头痛，停留１小时可发生肺气肿，以至死亡，作业现场空气中容许的阀限值为0.2mg/m3
3．空气消毒的方法有很多，消毒剂也有很多选择。具体要根据车间情况，卫生洁净要求来定。
1）甲醛熏蒸，食品厂已开始少用。
2）臭氧消毒：奶粉车间等干区有使用
3）冷灌装车间：目前大多使用过氧乙酸（1500ppm左右）喷雾消毒，雾粒度为50-60u,每立方米为30ml消毒液。
4）对于办公室，写字楼，可用季胺类消毒剂，浓度1200ppm左右，雾粒度为50-60u,每立方米为30ml消毒液。
当然也可以用氯类消毒剂，但考虑到腐蚀性，一般不建议。
在进行空气喷雾消毒时，是不允许员工进行车间的，怕消毒剂对员工的健康有影响，消毒后还要通气置换。然后才可以生产。

5、细菌总数平皿上出现满平皿的一片菌落的原因
（在培养皿内出现的需要检验的菌落总数并不多，但有很多的表面菌，菌落有乳白色或淡黄色，并且做的20多个样品同时出现）
是芽孢菌生长，如果细菌中有芽孢菌，这种芽孢菌就会大面积生长，整个平皿就全部被盖满，这种情况十分恼人。
除增加稀释倍数外，最好是采用倾注法检测，采用涂布法这种情况更严重，如果还不行，就在上面盖上一层1.5％琼脂粉。可防止芽孢菌扩散！这种菌菌落形态白色，或乳白色，成片状，生长速度很快，大多有臭味，这是芽孢菌的特征
正常的湿热灭菌完全可以杀灭，因与培养基无关不大，如出现此菌后建议平皿等器皿采用间歇灭菌的方法
1、不知是否做了空白对照，如果空白对照出现同样问题，可能是培养基问题或交叉污染问题；
2、为了减少蔓延的干扰，试验时可采用双层琼脂法，即先用10mL的琼脂倾注，待凝固后，在其上加3-5mL的琼脂即可。

6、乳糖胆盐培养大肠，有时只产酸，有时只产气，是何原因？
大肠杆菌乳糖胆盐实验时，出现弱酸性，革兰氏染色为阳性链球菌，什么原因？
能产酸的菌有很多，这种现象应属正常。
这里大概存在大肠菌群与大肠杆菌的区别，大肠菌群中也包含一部分球菌，你做的染色中出现的链球菌也有可能是涂布不均匀出现细菌叠加在一起的情况，由于大肠菌群中包含厌氧与好氧的菌株同时存在，所以会出现只产酸的情况；只产气的情况大概是由于产酸较少，看起来不混浊、无沉淀。如果你的指标是大肠杆菌的话，是不能单依靠乳糖发酵和革兰氏染色来确定的，还需要按SN中的规定往下继续做。
如果真的要知道到底是什么菌的话，纯化，做鉴定。
7、哪位大虾能提供车间工器具还有操作工衣服、手套的微生物取样方法
GB 1 59 79-1995《一次性使用卫生用品卫生标准》（见附件）
5生产环境卫生指标
装配与包装车间空气中细菌菌落总数应<2
工作台表面细菌菌落总数应<20 cfu/cm',
工人手表面细菌菌落总数应<300 cfu/只手
500 cfu/m'o
，并不得检出致病菌。
样品采集
在动态下进行。
室内面积不超过30m'，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙lm;室内面积超过30
设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1 me
采样时，将含营养琼脂培养基的平板(直径9cm)置采样点(约桌面高度)，打开平皿盖，使平板在空
气中暴露5 min,
E1.2细菌培养
在采样前将准备好的营养琼脂培养基置35`C士2C培养24h，取出检查有无污染，将污染培养基剔
除。
将已采集的培养基在6h内送实验室，于35C士20C培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
工作台表面与工人手表面采样与浏试方法
E2.1样品采集
工作台:将经灭菌的内径为5cmX 5 c m的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水
的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10 mL灭菌生理盐水的采样管内送
检。
工人手:被检人五指并拢.用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，
然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放人含10 ml灭菌生理盐水的采样管内送检。

8、培养基不溶化的原因？
（因为每次所需的培养基不确定，所以都需要多配一些
但是下次再剩下培养基的基础上进行灭菌，很难溶化
请教各位，以解惑）
我也是用微波炉的，但是只需4分钟左右即可。
一般配药全部分装灭菌后，放在冰箱备用。
培养基不要两次高温灭菌。最好一次用完。
培养基用过后是不能再次灭菌的，有许多性质会改变的，特别含糖培养基。
培养基如果没用完，下次再用的话，一定要保证无菌，存放于冰箱中，下次在电炉上煮即可。不须重新灭菌，若已染菌，就不可再用。
9、检测细菌总数的误差为多大？
大侠们：你们在检测菌落总数时，如果两人同时做，又没有误差？误差最大限度是多少？GB中没有明确指出？你们是怎么来看待的呢

SN方法上有嘛，操作者对同一平板复核自己的记数结果，其差异应在5%之内，其他人复核应在10%之内。如果是对同一个样品做2份实验其结果就不好说了。
CNAL有过细菌总数的能力验证,同一分样品(干粉)200多家实验室结果各不相同.

[本帖最后由质量人于 2008-6-12 20:25 编辑]

GB 19258-2003 紫外线杀菌灯.rar
(2008-06-12 20:09:11, Size: 3.55 MB, Downloads: 2)

GB 15979-1995 一次性使用卫生用品卫生标准.pdf
(2008-06-12 20:09:11, Size: 801 KB, Downloads: 1)

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质量人发布于2008-06-12 20:10:02

10、求助洗耳球的消毒方法
洗耳球可以耐受121℃的高温,开始我也以为不能,后来心想不就是一个吸球吗,坏了再买,就用121℃20分钟灭菌试了一下,没有明显的影响.灭菌的时候吸球我是用牛皮纸包着的
在每次使用前都将洗耳球的嘴在火焰上方反复吸吹几次（以不烫到为度
先用75%的酒精吸进去消毒
吹吸几次，将75%的酒精尽可能吹出来
在吸进无水乙醇干燥
洗耳球要放在无菌室里专用，不要拿到外面，这样才能无菌室在每天后能确保其得到灭菌

11、准备筹建无菌室,请问各位前辈大哥大姐,要注意哪些问题呢?
如果是食品微生物，达到以下应该满足要求：
双缓冲，顶、墙光滑，紫外灯：1盏/3M3、距工作台面1.5M，一个物品缓冲窗，每人3M2，加一个分体空调，内循环的
地板我也觉得比较重要，一般的瓷砖容易藏菌。
禁止将乱七八糟的东西放置到无菌室，包括培养箱和烘箱。马上搬出去。
无菌室的要求
1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。
2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。
3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。
4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜，其电源开关均应设在室外。
5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。

12、琼脂培养中的长出了形态各异的微生物菌落
有不同的菌落才比较正常，如果菌落一直都一样就很奇怪了。
这是最正常的现象了，如果所有的菌落都长成一个样子你又该怎么去区分他们呢？

几点建议：
1.试验的目的是检验其中微生物的数量，对于可以生长的微生物的形态没有必要去深究。
2.如果要保证试验的准确性，要保证计数用的平板上的菌落应该在30-300之间，少和多都有较大误差，切记。
3.在你所述结果中，如果出现了蔓延菌落，将十分讨厌，可行的方法是缩短计数培养的时间或分两步计数，已经记过数的在平板背面做标记。计数完后继续培养到预定时间，再计数，这次要数没有标记的菌落。这样可以防止在规定时间应该生长的菌落由于缩短了培养时间而没有长出来，毕竟我们需要的是一个客观的结果。
4.不同平板之间菌落差异大可能的原因是：浇平板时温度有差异，高温平板中部分微生物被杀死；所用培养基有差异，不是同一批的；使用的部分平板上有残留的抗菌物质；培养条件不同等原因，唉，要具体问题具体分析，我也不知你分析的什么样品？再有问题下次谈吧！

13、洗衣粉可不可以用来洗平皿？

我们都是用洗衣粉洗的，只要冲洗干净就行了。
干扰好像是说作荧光的时候不能用洗衣粉洗相关的瓶子。因为洗衣粉是加酶的，对实验结过有影响。
洗衣粉可以用于洗涤平皿，但一定要清干净。否则一方面使培养基PH值升高，另一方面洗衣粉有一定的抑菌、杀菌作用，会影响目标菌的培养与生长。

[ 本帖最后由质量人于 2008-6-12 20:16 编辑 ]

质量人发布于2008-06-12 20:10:23: 14、培养基减少的问题
我们是用培养皿测试空气飘落菌的，但培养48小时后经常发现培养基几乎消耗完了，但是菌落完全看不到。想请教到底是为什么，到底算不算有细菌存在？不存在的话，培养基又是被什么消耗的？如果是培养基溶化，那也应该有溶化液的，可是现在培养皿中就会有几滴水，而培养基不见了，严重的几乎见底了
我认为培养基少的原因一般是培养基内的水分蒸发或溶化引起的，细菌很少有消耗培养基量的现象。
出现这种情况有两种可能：1培养箱的温度指示不准，温度过高培养基溶化。2平皿放置的不对，你是怎么放的培养皿盖朝上还是朝下？
在培养箱里放一杯水
你培养基浇的少了，你肯定没有浇满15ML。
我们现在用的玻璃平皿有2中，一中是国产的另一中是日本的，2中平皿基本都浇同样量的培养基，国产的就像楼主那样的情况、日本的还是有培养基的。量都不满15ML的。国产的平皿薄，水份蒸发快！
15、关于微生物实验中吸管的使用方法
用嘴吸会不舒服呀，量少可用胶头套在吸管上就可。量大就用洗耳球。
用移液枪来吸
洗耳球不好用，球、管各需一只手，无法再拿试管等（特异功能的除外）
应用乳胶头，套在管口上，1ml和10ml的都有
16、LST管出现浑浊但无产气的原因
1.变形奇异杆菌确实会这样，有一次我们就是发现LST和BGLB变色不产气。就做了纯化鉴定，证实是变形杆菌
2.标准不同，时间不一样的，我们的国标是24H，乳糖胆盐发酵；大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的FDA、BAM和SN法是用LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）培养48H，这两个方法哪个好判断产气情况我不知道，各位过路老师可以指导下!如果用3M的测试片检测,只要24小时就可以看到结果,现象很明显.需要检测大肠杆菌的话有些产品要48小时的.
3.产酸不产气的微生物多了，你要注意要有阳性对照（标准的大肠杆菌）！
17、大肠菌群从产酸产气的发酵管接种到伊红美兰培养基。如何操作。要转种几个平板
请注意：
将产气的发酵管分别转种在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后.........

也就是说，如果9支发酵管全部产气，那么楼主要接种9个伊红美兰琼平板。当然如果操作熟练的话，一个平板可以划线接种两支发酵管，但一定要标明稀释度，作好标记，以防混淆。

[ 本帖最后由质量人于 2008-6-12 20:17 编辑 ]

质量人发布于2008-06-12 20:10:57: 18、关于大肠菌群得报告问题
如果水检测大肠菌群没有，怎么写报告呢
小于3cfu/L呀
GB中食品检样检测用九管法，报单位是MPN/100ml，最小值可报告小于3MPN/L
GB中生活饮用水检测用2瓶（100ml)10管（10ml)法、水源水用15管法，报告单位是MPN/L，最小值可报告小于3MPN/100ml
卫生部生活饮用水卫生规范用15管法，报告单位是MPN/L,最小值可报告小于2MPN/L

19、GB法与SN法检验结果的差别（GB即国标法,SN即商检法.）
SN方法检测的更严格一点！检出的几率也大一点。
的确有这样的差别，我们做过对比。

可能国标的检测过程中的革兰氏染色这个步骤，会因为各种（染色试剂、处理时间、检验员的技术水平、镜检观察时谨慎程度以及挑取菌落的有限性等等）因素漏掉了部分大肠菌群，而造成结果偏低。
在行标中，没有染色这个过程，相比之下，革兰氏染色与通过导管观察产气，后者更具有简单易辨别的特点。漏检的可能性会小些
国标在检测大肠菌群中用的是乳糖胆盐肉汤和伊红美兰，再加乳糖肉汤。SN的标准采用了LST和BGLB两种培养基。两种方法确实有偏差，我们做过些对比。但是ISO中大肠菌群的定义：在30或者37度能发酵乳糖产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群并非一个生物学种类，而是生化特性相近的一个群体。所以按照SN的标准去做结果高的话也不能算作假阳性。
至于2006版的国标改了，主要原因应该是照抄了FDA的检测方法。原话是“等效采用”，不过我们的检测方法有必要跟"国际接轨"哦,毕竟食品安全已经成了技术贸易壁垒。
跟人认为检测方法其实可以多样化，尤其作为工厂可以采用些简洁、快速的方法。只要这些方法得到验证就好了。国标可以作为对比或者仲裁的方法。
如果大家用国标检测大肠菌群，要三天时间才能发货。选用一些快速方法，可能只要一天就发货。关键是要验证就好
20、如何判断大肠菌群产气
大肠菌群的检验应该根据起定义来做：产酸产气，革兰氏染色阴性无芽孢的杆菌！！！这里的几个条件一个也不能少，首先看ＢＧＬＢ产酸产气，然后做证实实验：复发酵，ＥＭＢ划线，镜检
如果只产气不产酸能判定阴性吗? 肯定是阴性,阳性一定要产酸产气
21、请问大肠菌群超标是不是意味着致病菌也超标
大肠菌群超标，
一般意味着该食品被粪便污染，
同时可能存在肠道致病菌！
大肠菌群指标对于食品来讲，是一个的基本的卫生指标，它的数值的大小只是说明被粪便（包括间接来源和直接来源）污染的程度。数值越大说明被粪便污染的程度高，反之亦然。

一般来讲，大肠菌群的多少还与致病菌的存在有一定的关系，也就是说，大肠菌群越多所含有致病菌的可能性越大。但是由于所检测的条件有限，未检出也是经常出现的。
大肠菌群只是一个特殊的指标，其标准是兼性厌氧产气的革兰氏阴性菌，基于大部分的肠道菌都有这一特征，因此一般作为判断食品被粪便污染的指标

[ 本帖最后由质量人于 2008-6-12 20:18 编辑 ]

质量人发布于2008-06-12 20:11:18: 22、大肠菌群超标的可能分析
大肠菌群不仅仅来自动物，还来自人类的粪便。由于人和温血动物的粪便的存在，造成了交叉污染，继而到人体（手、脸等等）衣服、与人有关联的一切用具，如楼主所说的机器和设备等，都会存在大肠菌群。

可以这样说，任何与人接触过的物体，包括直接接触和间接接触，都非常有可能存在大肠菌群。甚至在人类吃饭用的用具，也不能排除存在大肠菌群，只是数量上的区别而已。
2.大肠菌群的确是动物源微生物，但是在加工过程中水、卫生状况不好的原料（比如农产品）、没有彻底清洁的工具、不合理或者不彻底的清洁方式都会引起大肠菌群超标。
还是要从以上几个方面来进行控制。其实也就是SSOP中的几个方面，不要只停留在纸面上，要认真地做下去
23、大肠菌群与大肠杆菌的区别：
大肠菌群的定义

      大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
      大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠杆菌的定义

      大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。
      大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为+ + - -或- + - -的细菌。
      与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
卫生学意义

      大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。
      食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
      大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
大肠杆菌的生物学特性

基本形态：
      此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm×1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特性：
      大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。

[ 本帖最后由质量人于 2008-6-12 20:19 编辑 ]