BECKMAN DU 640紫外分光光度计

BECKMAN DU 640紫外分光光度计

一、实验原理

           紫外分光光度分析法，是依据物质分子或离子团对紫外的特征吸收而建立起来的分析方法，可进行定性、定量分析和结构分析。

           一定结构的分子只吸收一定能量的辐射。处于基态的分子受光能激发，它可以吸收特征波长的能量，跃迁到较高的能级（激发态），产生吸收光谱。吸收的能量越多，跃迁的能级越高，波长越短。据此就可以根据吸收光谱的形状，特别是吸收峰的波长位置对物质进行定性分析。

           利用蛋白质因含有酪氨酸，色氨酸（有苯环共轭双键）的特点，在280nm处有一吸收峰，光吸收值与其蛋白浓度成正比。光吸收值为1.0的蛋白质溶液，估算它的浓度为1mg/ml。测定范围是0.1~1.0mg/ml.

电子能级的跃迁

二、紫外/可见分光光度计的分类及特点

l                   1、单光束分光光度计

          一束经过单色器的光，轮流通过参比溶液和样品溶液，进行光强度的测定。噪音小，信噪比高。        

l                   2、双光束分光光度计

          经单色器的光一分为二，一束通过参比池，另一束通过样品池，一次测量可得到样品溶液的吸光度。可消除光源强度变化引起的误差。

l                   3、双波长分光光度计

          同一光源发出的光被分为两束，分别经过两个单色器，交替照在同一溶液里，测到两波长吸光度之差。可测定浑浊样品。

三、应用领域

1、医药、化工、冶金、环保、地质等领域。

2、细菌、酵母培养物的浓度的测定。

3、蛋白质、核酸、多肽等物质的测定分析。

4、酶催化反应中产物的产生和底物的消失的追踪。

四、仪器结构

         仪器型号：BECKMAN-DU 640

BECKMAN-DU 640紫外/可见分光光度计

DU640紫外分光光度计系统是内含微机控制的单光束紫外/可见分光光度计，波长范围190~1100nm，其组成有：

      光源：  由钨灯和氘灯组成， 分别用于可见光区和紫外光区。其基本要求是：能够发射足够强度的连续光谱，辐射能量随波长无明显变化。

      单色器：单色器的作用是从连续光谱中分离出所需要的窄波段的光束，它是分光光度计的核心部件，其性能影响到测定的灵敏度、选择性和工作曲线的线性范围。

      样品池：吸收池根据材料有玻璃吸收池和石英吸收池，前者用于可见区，后者用于紫外和可见区。

紫外分光光度计样品池

      温控器：温控器为半导体控温系统，可在10~90°c 范围内快速调节。

      检测器：检测器使用的是光电倍增管，其特点是响应速度快，灵敏度高。

      显示系统。

      打印系统。

Du 800(640) 光路示意图

2、可提供三种标准的常规的测量方式，即固定波长分

      析、全波长扫描和时间动力学测定。除此之外还有

      一个非常明显的优势是可以选配在生化和分子生物

      学方面常用的一些测试软件及相应的配件，很容易

      扩充仪器的测试功能，因而被誉为生化型紫外分光

      光度计。

3、所配置应用软件：

   ⑴   蛋白质测定软件：有双缩脲法、UV法等8种方法。

   ⑵   核酸测定软件：有4种指定的参数法和一组通用法。

   ⑶   DNA/Oligo Quant Analtsis：有9种针对DNA和

          RNA的方法。

   ⑷   酶机理研究软件。

五、实验步骤

1、打开紫外分光光度计，显示器，再打开钨灯和氘灯，预热20-30分钟。

2、配制需要测量的样品溶液和空白对照溶液。

3、洗净样品池，再用空白对照溶液冲洗1至2次。

5、先用空白对照溶液进行空白测量，然后用同一个样品池测量样品。

6、分析图谱，保存图谱，打印结果。

7、关机。先关钨灯和氘灯，显示器，后关主机。

8、用蒸馏水清洗样品池三次，倒置在吸水性纸上，干燥后放入盒中保存。

9、收拾桌面，登记实验记录。

六、注意事项

1、光源：光源灯有一定的寿命，仪器不工作时不要开灯，若工作时间短，可不关灯和停机，一旦停机，则应等待灯冷却后再重新启动，并预热15分钟左右。

2、吸收池是光度测量最常用的器件，要保护吸收池的光学面，不允许用手或粗糙物接触光学面，使用后则要仔细清洗。

3、不需要温度控制的时候，不要开温控器；实验完毕后要关机和打扫桌面，并登记实验记录。