中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 大 肠 菌 群 测 定

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

$J?5fOf W0食品伙伴个性空间^g;WK%d;B0gso

食品伙伴个性空间,m|+F|!A d&}MtC

食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验食品伙伴个性空间 ]Xa![l
g%I
GB 4789.3-94食品伙伴个性空间5`J7j3e^

Y'Z,{#e ^M1~Q0

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大 肠 菌 群 测 定食品伙伴个性空间lY }"u`

P6di&V!W Y%p0

.E!~2S2K.q0

代替GB 4789.3-84食品伙伴个性空间CyM"i&v
r"o r*X3X

食品伙伴个性空间5g'v#N*aqqoc p

食品伙伴个性空间5I9^,KA+noMO.S \

Microbiologicl examination of food hygiene食品伙伴个性空间gx8d:O:?{1}

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Detection of Coliform bacteria

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8PRO g5z wF01食品伙伴个性空间%B*m&@?}lU
主题内容与适用范围
u5\b*RO5v[{;h0
.gRf6B__l
S0本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。食品伙伴个性空间a o__,?5lT@
食品伙伴个性空间:D {De/Lv?)z9]
本标准适用于食品中大肠菌群的测定。食品伙伴个性空间1L FV%Fhl1b!X
食品伙伴个性空间fh.HC'g8N+wn
2食品伙伴个性空间#W0`
v?;o|PL4C
术语食品伙伴个性空间s%I+t'`Ye

zs @C9p.cp:k!q0大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽
G.jt,@S~0胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质
`ZG*J9RC0量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
_ Y/K'~~ il hr,S0食品伙伴个性空间Nz@S8S"J%dr
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
FB!veT4EC0食品伙伴个性空间lL YUhP
3
*ek/~@H7eP0引用标准
!E"mK_$Q#h V#r!??-`0
DK"aox8}l0GB 478.28
!Cb1E _0Kejm0食品卫生微生物学检验食品伙伴个性空间4P2MB8c!a$pD R^*ET
染色法
${W3@:a&W2| e#w ~p0培养基和试剂食品伙伴个性空间dt!\~?j&}A0T

1Q@ yE.CF04

Au%|Qt7X5OK0设备和材料
8m/PW.I1L1hW vH{04.1 温箱：36±1℃。食品伙伴个性空间pO6^ ^KD f!v
4.2 冰箱:0～4℃。
e4LO([-`:J%sj04.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。
S6S'Fe Dx)mc04.4 天平。
(_[|1Z3]Ku6d04.5 显微镜。
jD_
}z04.6 均质器或乳钵。食品伙伴个性空间*~-P:Zr_Y
4.7 平皿:直径为90mm。
%d:I3CV8Fe04.8 试管。
Fu&zjdumwo8Oz04.9 吸管。
.mT\{z`f-Gi1h.v04.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。食品伙伴个性空间 u$d#X8g_-?b#d
4.11 玻璃珠:直径约5mm。
'cr1h4a^#Zh%y04.12 载玻片。
sF&V"Nn2_+_h$a04.13 酒精灯。食品伙伴个性空间7Hs lR,p9R
4.14 试管架。食品伙伴个性空间RY@5cA
食品伙伴个性空间 Q|PjrETW
_'_
5食品伙伴个性空间AX&@v}
培养基和试剂
*[l R$_,c7Be"G05.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。食品伙伴个性空间)O5r0]F9t
O
5.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。食品伙伴个性空间Xi |/Hz
5.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
6\,B!w2] }+HF1g/e05.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
tB-wK$M/lC?05.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。食品伙伴个性空间*yhj"A5^(n
5.6 生理盐水。食品伙伴个性空间'w"b3K9|)U;xkW!yQ
5.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
%wkf:r4[0食品伙伴个性空间~a`#c!mm
6
lpq:Gw f4}D0检验程序食品伙伴个性空间
TL1[%U Y,gQ

$g ^'t7VyPA'vh0大肠菌群检验程序如下:食品伙伴个性空间q{y4C:iX2|
食品伙伴个性空间{h&g\[/dtN[


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-]&r@|~lg3ElTqX*X0食品伙伴个性空间;s^DaQAiyI?
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FTZ!i2Xw0检样
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食品伙伴个性空间Q5R:a c,Nx!t,z
食品伙伴个性空间$w!I+AP?:F s
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┌──┴──┐食品伙伴个性空间1Y JC_$T%P
食品伙伴个性空间8`:GHOwB#K_w

xY nrwRLv!y0│食品伙伴个性空间;N(xN/q%d
稀释
yMe*X5F&l-D}]0│
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乳糖胆盐发酵管食品伙伴个性空间.AV(H#{;dhgGN
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食品伙伴个性空间NBIV$Sq
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│食品伙伴个性空间1V9Q^1y%s K

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└─┬───────┬─┘食品伙伴个性空间l$O$?V&vng

x[5E L8S W0食品伙伴个性空间u~T}Y4S^,g
┌───┴─┐
!y&uO7G(A7S'y3m%EJ0┌─┴───┐食品伙伴个性空间 JO4L(fV&jb
食品伙伴个性空间%[A
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│食品伙伴个性空间^U4x;_$@e
不产气
X E { t-`T[z4i0│
'}u'eo.e&M~RU2J0│食品伙伴个性空间[$}r&h-d,cH/UK$k'`
产气食品伙伴个性空间#~4i&Bp:C4b.c!W
│食品伙伴个性空间N(k)S$ly$lv

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└─┬───┘
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V@%@%V"l*Bn/w-t"@0│大肠菌群阴性││ 伊红美蓝琼脂平板
^/X1`k"a1[T^0│食品伙伴个性空间W4}B0Zr+? x0k

?h6n,c$@r'gqX0└──┬───┘│食品伙伴个性空间axA+qp6r'zaR\.pE
36 ±1℃ ,18±24食品伙伴个性空间;S#^Zu8J
│
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报告食品伙伴个性空间jCis,x rD&`'h
│┌───┴─┐食品伙伴个性空间T N3H
^ Z:z D(G;p
┌─┴───────┐食品伙伴个性空间'jDc}4X;]
食品伙伴个性空间$u%z`H1b8_
└─┬───┘│革兰氏染色│
3c w GE |I.Xh ^'L;f0│食品伙伴个性空间V5~z t.If
乳糖发酵管
Fm EsB nF&G+K}0│食品伙伴个性空间^%l-g,xa!Ky

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│36 ±1℃ ,24±2h
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Ns)Vj+aG0└─┬──────┬┘
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┌─┴───┐┌──┴───┐┌─┴───┐┌─┴───┐
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C/I.fW#{G3Y5{;v.e0│革兰氏阳性││革兰氏阴性
C^be*L e0││食品伙伴个性空间 y5oe$Q:d@ O
产气
U&FSP7?x*n0││ 不产气
+a5Wu J-_Zr?C0│食品伙伴个性空间$MS#A-b)MW&YA"w

?d_n~P%[%a8h0└─┬───┘│无芽胞杆菌
tr*MlfV)y0│└┬────┘└─┬───┘
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S/W(h^Ad}k9PT0│
Kj(IA/h$@d:z0└────┬─┘
(z?.Mnd;u!V*J0│
+E"j\k@X(rJQ+j0│
m~B2X6Epd0
%I(|y_5}V5r0┌─┴────┐食品伙伴个性空间;^6B!O4R8~D],A
┌┴───┴─┐┌────┴─┐食品伙伴个性空间c4i"Lo#Q\9]e6B

mY)pHZ0│大肠菌群阴性│食品伙伴个性空间;U*On i'F/GGg
│大肠菌群阳性││大肠菌群阴性│食品伙伴个性空间 w~&Jm!T]JK;BX

%Iq u)C%IB4W0└─┬────┘食品伙伴个性空间6JYBo8a{QFIl
└───┬──┘└────┬─┘
o+fKxj/T5H1^ d0食品伙伴个性空间JxP'F]V,Pr$Ig
┌─┴───┐
+I r6I,e!M0┌──┴──┐
,j Jy8guRd0┌───┴─┐食品伙伴个性空间'r-v1xrjW7\#f6I
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食品伙伴个性空间];iS%SAp
│食品伙伴个性空间-j\2vczG7L
报
\4I}"Z?^ I*i$c0告
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A$Pq},Y o0报食品伙伴个性空间{,j&y$`B/F,A%l
告
l8~#}:U2g$tB0│食品伙伴个性空间y Q6}q^;ZP4t
│食品伙伴个性空间+U p2V8cB#W
报食品伙伴个性空间'D/A9wPQ5i%|
告食品伙伴个性空间DU%A$K ^v
│食品伙伴个性空间"^$jAs0k^ TQ2x
食品伙伴个性空间
ab&Nxm(w0};_
└─────┘食品伙伴个性空间Upu1y:G][Lii
└─────┘
H&K1I2K?'wVI0└─────┘
HD YR|;w;I07
K5dp$Lun0操作步骤食品伙伴个性空间yiQ(hw3[X
7.1 检样稀释食品伙伴个性空间/R!}2cC9AS*zn
7.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌食品伙伴个性空间7gXw\|T
玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的
H!\Xcrn w0均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10食品伙伴个性空间!Sv5J!Pl+Hm$p
的均匀稀释液。食品伙伴个性空间 B`8px J7_pIZ2o
7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液
a'p1RO |
Q0C7G0的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
&e~:|&{'a;g(ZQ;tQ07.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1食品伙伴个性空间d8[zO9F1{Lk'L
支1mL灭菌吸管。
z?t3rV!`&]7P)w(k07.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释食品伙伴个性空间1RV^cC\Rz
度,接种3管。
J&TR$BJ(O?2O'Ms07.2 乳糖发酵试验食品伙伴个性空间6jz)pXmK+N'{6]
食品伙伴个性空间H4[ii+VG^|
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发
,T U@ GXZ
qX2]0酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃食品伙伴个性空间N@\{*mI.Y
温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如食品伙伴个性空间X9L@&UJT
有产气者,则按下列程序进行。
px~$t,q9^#l3d%l07.3 分离培养食品伙伴个性空间2W8n
gEPO
食品伙伴个性空间,N&d+mJ4hO.LF
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,
t!smbC]:d0然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
|u3l-mBr07.4 证实试验食品伙伴个性空间0eD$t#z
]Ob0tB_%oe

jfp;y ?U7_0在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵
q[JVj$~aY;p|:S+_0管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为食品伙伴个性空间Ru;\+l
p,GKa
阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。食品伙伴个性空间5`w'D @8Zk7n
7.5食品伙伴个性空间3fNqn!g)X][ E
报告食品伙伴个性空间"x P&CuVd

/Au3[%~T0f6] z0~0根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。食品伙伴个性空间Jnn@G7zpX

(@L*}`(w}08食品伙伴个性空间LKT&?+E sWc
粪大肠菌群(faecal coliform)
5K;M*N9B.~J\-Yv08.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见7.2条)转 种于EC肉汤管内,食品伙伴个性空间*L}_X-Si,x
置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养

B-o Z}&o+@I%@U0后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉食品伙伴个性空间h y0vV1hh
汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证
9uBh3i#~l.F&QD0实为粪大肠菌群阳性。食品伙伴个性空间R2^J}fudjw
8.2 结果报告食品伙伴个性空间uL1kz%O.Fa'D Y x

P(r8W#U.jXk5S+DM0根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群
N6l1[W/T,h${J7ikY n0的MPN值。
V
a2G+TE0食品伙伴个性空间Z$C.T2T?pM[
大肠菌群最可能数(MPN)检索表食品伙伴个性空间&iM3Z!C A/[%r
┌──────────────────┬─────┬─────┐
Z9T8]na0│食品伙伴个性空间S?'C(Dd Y'~+m Eqr
阴性管数
2|P nx(xY0│食品伙伴个性空间7{C a)X6?&`e| W
MpN
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│1mL(g)，*3│0.1mL(g)*3│0.0lmL(g)*3 │食品伙伴个性空间
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│下限│上限│
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│ ＜30
^`4w#Va6p5M,@%H0│＜5│食品伙伴个性空间'Z2D*tF#s ff
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│食品伙伴个性空间i+g;v-f Qp/N.p"~s
│食品伙伴个性空间 _.|ZT;ni
0食品伙伴个性空间9@"m*V(cXQ,p
│
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│
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5x4gaAp'W9u&gFW0│
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│食品伙伴个性空间v|'?I+J
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│

fga"Z@00食品伙伴个性空间l)g?z9JYp;AwG
│食品伙伴个性空间RCE.}hR3^H5HG
3食品伙伴个性空间9TN3F}?)~
│食品伙伴个性空间g0P,?q7?2T.Ze
30
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│食品伙伴个性空间$lu+AkL
├─────┼─────┼──────┼─────┼──┼──┤食品伙伴个性空间7^@+{3jk(b0DWi
│
"^!@4yuCHS00食品伙伴个性空间,`ND;V6g:h
│食品伙伴个性空间x-}tg/z/x&j"T3A
1食品伙伴个性空间 d)F+^J4yp)G*n E
│
4Xa}c3N5L00食品伙伴个性空间#l a.t$I[5H^M
│食品伙伴个性空间"tFA^_ re
30
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@%iy&?x%NJ0│
5p0s&Vd!J0│
6ho$|'k9\{f1E&z00食品伙伴个性空间y1v!^@_|{3| [&B&Po
│食品伙伴个性空间~
rGA~0T-E7F&^N
1
9B_5Y5f@fjc0│
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A/K0q'I#l p(\0│
o?\h(@2X/O060
Rb#oUF@bo0│
+omF1oygb x W0│130 │食品伙伴个性空间3q9J@&@!r%Mc_
│食品伙伴个性空间YpP(l
e%~
0食品伙伴个性空间 K v3hp'ipP
│食品伙伴个性空间'C*\@k6}*ID
1
G9EU.dqSV*[?0│食品伙伴个性空间%MN,f*_;a7p"[ |
2食品伙伴个性空间-G3S7^Di#E,~+U
│
Z KK F!K(u:L-d090食品伙伴个性空间 I8m$@,Xg4H.L[
│
#eO~zNI0│食品伙伴个性空间
A*}%QK-b!xjx
│食品伙伴个性空间~|I1Soa c1o'sx
│食品伙伴个性空间E/f;G(w;X
0
XZ+t/`Pq8b0│
4R LG h*N7S3e01
.hU.A{e~_/KR0│食品伙伴个性空间s,lLNVz
3
(m3PZ
f$Qu4w0│
2XCU[1`6HU0120
_a&RcAH0│
9U6~7oE3rf.@0
7e,B}"D6ND8`0│食品伙伴个性空间A dxVJ2S|.@6wq
│食品伙伴个性空间_&Pu/\gA\0A1CTV)S*P
└─────┴─────┴──────┴─────┴──┴──┘食品伙伴个性空间0\1T[CQ h
食品伙伴个性空间3T5rD}HpSd3O/\
续表
Nt9K:P/Y;l4_0┌───────────────────┬────┬─────┐
'm0oUP0j.I$C0│食品伙伴个性空间ds.Vl&Klh2Z6`v.i
阳性管数食品伙伴个性空间c$T8pQhu
│ MPN
rP:yt4w(sYD
S3E0│95％可信限│
$x m2Y#R?Ye(V K
y#eL0├─────┬──────┬──────┤100mL(g)├──┬──┤
tiZ|e!B,j0│1mL(g)×3 │0.l mL(g)x3 │0.0lmL(g)X3 │食品伙伴个性空间Q?^lVo.I,w
│下限│上限│
"j q:x(Q2R'g*C0├─────┼──────┼──────┼────┼──┼──┤食品伙伴个性空间Seh}2a _h.K
│食品伙伴个性空间aT@~\
0
m fYi%D5s'o\bb0│
cbE+sp
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x9yOY@nP'GZ0│食品伙伴个性空间,J#{9}\m&_ ?/D5JZ
0食品伙伴个性空间u-E1M O&IPG
│
/ufM!?&O#jDO060
C9M#m9sU_0│
ZKr$}pPYh4JP0│食品伙伴个性空间*Z_*a4^B
│
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│食品伙伴个性空间g2RD6a2VPD/P
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│
(r;H`J6m1a?*\01食品伙伴个性空间5~3oO&D~)Y
│食品伙伴个性空间 VR-x_}k$MO
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│
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│食品伙伴个性空间$y7s6H7f'S
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│食品伙伴个性空间
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│食品伙伴个性空间5? K KJ:~#VSY,Y
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└─────┴──────┴──────┴────┴──┴──┘ 注:①本表采用3个稀释度〔1mL(g)/0.1mL(g)和0.01mL(g)〕,每稀释度3管。　
2|8B/R(ywof6{,oA0②表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)、和0.1mL(g)时,表内数字应相应降低10倍;
eh;Wk.z&l0如改用0.1mL(g)、0.01mL(g)和0.001mL(g)时,则表内数字应相应增加10倍。其
y/~Vr#e#`:E)\ @.d0余可类推。
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T_Q9W0@0附加说明:
+];g{:U.j!HOz.g0食品伙伴个性空间mmW+L)y3V+Q'v!h!vu
本标准由卫生部卫生监督司提出。
7_aoJ5m:W3m1D0
(ek2Uje.V0本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
5? d9d"g!X0
'dMqe2Z:yK0本标准主要起草人刘宏道。
)H;px7s G*WYg3d0食品伙伴个性空间6{jM-m#nV
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。食品伙伴个性空间AZ9cgO2{3k9bB'V
----------------------------------------------------------------------------食品伙伴个性空间LW8[OV}

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中华人民共和国卫生部1994-03-18批准食品伙伴个性空间6X5k}.Y,mT%cH/K@N
1994-09-01实施

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