争取

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                   内容

1.研发背景

随着集团公司的不断发展，检验中心的检测项目、检测内容、检测数量也在不断增多，特别是检验中心的检测能力即将通过中国合格评定国家认可委员会的认可，将使检验中心的检测业务量大量增加，常规的微生物检测方法已不能满足集团公司发展的需要，为进一步保证集团公司的食品安全，寻求新的更快速的检测方法已成为检验中心当前工作的重点之一。受荧光PCR方法检测AIV、NDV的启发，检验中心已与有关生产致病菌PCR检测试剂盒的厂家联系，探索在食品微生物检测中，应用PCR检测方法检测致病菌的可操作性。

2.小组成员、职责

  WWW 总负责

RRR     负责PCR方法培训和指导

SSS    负责微生物检测和PCR的接口工作

AAA\DDD\FFF\等人参与技术操作

3.方法描述

①PCR沙门氏菌试剂盒检测步骤：

l      对样品液进行增菌

l      DNA提取

l      扩增试剂准备

l      PCR扩增

l      质量控制标准和结果判定

②对所用试验样品同时进行常规（SN0170）沙门氏菌检测，验证PCR检测结果的准确性。

4研发准备和投入

①人员培训：学习用PCR试剂盒检测致病菌的原理、方法

②设备及试验材料：荧光PCR仪、均质器、电热恒温培养箱、离心机、移液枪、无菌移液管、三角瓶、烧杯等。

③菌种、试剂：沙门氏菌标准菌种、沙门氏菌增菌液、场家提供的沙门氏菌试剂盒

5.试验过程

试验1． 10月16日，取4个样品用常规法检测沙门氏菌结果均为阴性的样品，再用PCR方法检测，4个样品中沙门氏菌也均为阴性。

试验2． 10月份，商品鸭突然出现大量死亡，10月26日疫病组接收了四户养殖户病鸭脾脏，用PCR试剂盒检测沙门氏菌，其中有三户检测出沙门氏菌。微生物组用相同增菌液进行常规沙门氏菌检测，结果在这三户养殖户病鸭脾脏中同样检测出沙门氏菌，并分离出O4、O5血清型。一户检测结果为阴性，和PCR检测结果一致。

试验3． 11月21 -26日，对11个养殖场病鸭的脾脏，分别用PCR方法和常规方法检测沙门氏菌，其中有7份用两种方法均检测出沙门氏菌，其它4份脾脏PCR检测和常规检测结果均阴性。

6.结果确认和结论

通过三次试验用PCR试剂盒快速检测和常规检测进行对比，检测结果均达到一致，证明用PCR试剂盒检测结果准确可靠。（具体见所附报告、记录）

7.用PCR试剂盒检测的作用、贡献

①PCR方法的优势：用PCR方法进行致病菌检测，是一种快速的初筛选方法，与常规的微生物检测方法相比，至少可以提前3天得出初步判断；PCR检测方法是对遗传物质——核酸的检测，特异性强，排出了其它杂菌的干扰；与常规的微生物检测方法的灵敏度、准确度基本一致。

②作用：PCR方法进行致病菌检测对我们来说不仅是开展了一种新的检测方法，同时为我们对可疑菌的定论提供了很好证明依据，减少了误判或错判的可能性，当用PCR试剂盒检测出阳性结果时，须用常规方法对所检出致病菌进行最终鉴定。两种方法配合使用，更加保证检测结果的准确可靠。

③贡献：用PCR方法进行致病菌的检测，不仅可以在食品当中使用此方法，养殖方面的致病菌检测也可以采用此方法，扩大了致病菌检测的范围，为及早判定属何种病菌引起和及时防止提供依据。

8.推广使用方案及意见

不仅用PCR可以进行沙门氏菌的检测，还可以检测：志贺氏菌属、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157：H7、    空肠弯曲菌、蜡样芽孢杆菌等。用此方法进行检测，可以达到快速、高效。

9.申请奖励

为了鼓励技术人员勇于创新、不断探索的精神，提高技术人员在检验领域不断进取的积极性，特请集团公司给于检验中心一万元的奖励。

10.所在单位评价意见

11.公司意见