【转】食品卫生微生物检验实验室操作技术要求
上一篇 / 下一篇 2009-03-19 21:07:48 / 个人分类:食品安全、质量管理篇
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一、 无菌操作要求食品伙伴个性空间V)?n6tm"f
食品微生物实验室工作人员,必须有严格的无菌观念,许多试验要求在无菌条件下进行,主要原因:一是防止试验操作中人为污染样品,二是保证工作人员安全,防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
M~v6A c3L01.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。食品伙伴个性空间 X8m_ y.Bg:L%\
2.进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。
%bM0v%OQh03.接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净。食品伙伴个性空间jk Q;? VT
4.进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。食品伙伴个性空间)t'ya3\s&jE#AC
5.从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。
]S ~:j yx:ney06.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
tj;IoG-_u07.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼。
x1R$DqWRF3q08.吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。食品伙伴个性空间1qY%paj;zx y8m
二、无菌间使用要求食品伙伴个性空间vzqD:|k;K
1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门,另设有0.5-0.7平米的小窗,以备进入无菌间后传递物品。食品伙伴个性空间"`,f+r QUCTY4sY
2.无菌间内应保持清洁,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。食品伙伴个性空间1H`e[ NK4A)R#r9VW}
3.无菌间使用前后应将门关紧,打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在
4.处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过无菌传递窗传递。食品伙伴个性空间Gr6A{O8k,LQD
5.在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。
2H(j#^1Y?0三、消毒灭菌要求食品伙伴个性空间;A QW G,t6E3J,t Z_3U E
微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。食品伙伴个性空间e~sh+P4QXF
(一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法食品伙伴个性空间8}'mY&Z,lT
1.灭菌前准备食品伙伴个性空间 a[ej y)udW
(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。食品伙伴个性空间2fZ#c!Zl7k%V-a
(2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。食品伙伴个性空间j ^|ss2Or1m)A
2.装放
8W{B5^X0(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。
sIxp ]0(2)大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。食品伙伴个性空间!S5f7M4O9M
3.设备检查
Y}rw~ca;V/K0(1)检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。
0hVY)\ F3e0(2)压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。食品伙伴个性空间L;C*^%RM8A`
(3)对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进行灭菌处理的要求。
@@WDU.K)d |0]&J04.灭菌处理食品伙伴个性空间bA"ur3f+eO\.{
(1)干热灭菌法:此法适应于在干热情况下,不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的灭菌。食品伙伴个性空间YhL:IXx
a.器械器皿应清洗后再干烤,以防附着在表面的污物炭化。
v)KQ7`L5C s(iH0b.灭菌时安放物品不能过挤,不要直接接触底和箱壁,物品之间留有空隙。食品伙伴个性空间{jRO0^,~"dE
c.灭菌时将箱门关紧,接上电源,先将排气孔打开约30min,排除灭菌器中的冷空气,温度升至
d.灭菌完毕后或温度升温过程中,须在
(2)手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:食品伙伴个性空间M$R+r7i1{
a.手提式高压锅在主体内加入
b.手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。
vK)?h e8P8BX0c.盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气10-15min)。食品伙伴个性空间X'C&t;j it:M}
d.关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。
YkKY(nx&c*C0e.达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸气,待压力恢复到零时,自然冷却至
(3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行:食品伙伴个性空间lE*yJBy5`F4i_
a.关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行预热,夹层内冷空气经阻气器自动排出。
/fBXOg$R"L y T+Y _0b.夹层达到预定温度后,打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。
([2A&d3b A N-Dd8c0c.待锅室达到规定的压力与温度时,调节进气阀,使保持恒定至食品伙伴个性空间 E `.r yj7`k#O
d.自然或人工降温至
e.使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器,在放好物品关紧门后,应根据物品类别按动相应开关,以便按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查,操作要求应严格按照厂家说明书进行。食品伙伴个性空间$BJV1g3nKY*f'?
3.煮沸消毒:可用煮锅或煮沸消毒器,水沸腾后再煮5~15 min,也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min,加入0.02﹪甲醛,
4.灭菌处理:灭菌后物品,按正常情况已属无菌,从灭菌器中取出应仔细检查放置,以免再度污染。食品伙伴个性空间kud.lS D'j
(1)物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物品使用。
@[S+b;n)wm0(2)取出的物品,如为包装有明显的水浸者,不可作为无菌物品使用。
w#AwD}%n;u0(3)培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。食品伙伴个性空间5Ov C'WFd
(4)启闭式容器,在取出时应将筛孔关闭。食品伙伴个性空间 Qq+X4t-@R*F E c
(5)取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。
H H[b7| Z]x?0(6)取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。
q js*x6F%@(X-[y0(7)凡属合格物品,应标有灭菌日期及有效期限.
V+x!r[f!Ug2q+w2}0(8)每批灭菌处理完成后,记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。
t/V7j5|tH0四、有毒有菌污物处理要求
Il9m&]9m1ZV0微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理,一律不得带出实验室。
d.O['_n1Vhs01.经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内,并隼中存放在指定地点,待统一进行高压灭菌。食品伙伴个性空间#|?9u Na^*ZJ^
2.经微生物污染的培养物,必须经
3.染菌后的吸管,使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液体不得低于浸泡的高度)再经
4.涂片染色冲洗片的液体,一般可直接冲入下水道,烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯中,经高压灭菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h后,煮沸洗涤。做凝隼试验用的玻片或平皿,必须高压灭菌后洗涤。
O b"v~?Sly05.打碎的培养物,立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位,浸泡半小时后再擦拭干净。食品伙伴个性空间K:YsW.l m)b
6.污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等,应放入专用消毒袋内,经高压灭菌后方能洗涤。
m7Ku7o0l |0五、培养基制备要求
Dd(`/Ez"F J#A pq0培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同,培养目的的不同,各种培养基制备要求如下:食品伙伴个性空间E7?4R H9z2vDt
1.根据培养基配方的成分按量称取,然后溶于蒸馏水中,在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。食品伙伴个性空间e'J(c/Z.a }eY
2. PH测定及调节:PH测定要在培养基冷至室温时进行,因在热或冷的情况下,其PH有一定差异,当测定好时,按计算量加入碱或酸混匀后,应再测试一次。培养基PH值一定要准确,否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高,故不宜灭菌压力过高或次数太多,以免影响培养基的质量,指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。
#n"PG3Fv&_mk03.培养基需保持澄清,便于观察细菌的生长情况,培养基加热煮沸后,可用脱脂棉花或绒布过滤,以除去沉淀物,必要时可用鸡蛋白澄清处理,所用琼脂条要预先洗净凉干后使用,避免因琼脂含杂质而影响透明度。食品伙伴个性空间8g.s)kl8C5I'^ Y
4.盛装培养基不宜用铁、铜等容器,使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。食品伙伴个性空间Cpk%u"i [@
5.培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的,又要注意不因加热而降低其营养价值,一般
6.每批培养基制备好后,应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基,使用标准菌株接种培养,观察生化反应结果,应呈正常反应,培养基不应贮存过久,必要时可置