紫外分光光度法测定糖精钠含量

1．原理

   在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取，经薄层分离，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长270 nm处测吸光度。与标准比较，定量。

2．仪器和试剂

 （1）仪器设备

   分光光度计；玻璃纸：生物制品透析袋纸或不含增白剂的市售玻璃纸；微量注射器；紫外光灯：波长253.7 nm；薄层板：10 cm×20 cm或20 cm×20 cm；展开槽；玻璃喷雾器。

 （2）试剂

  a.碳酸氢钠溶液（2％）。

 b.糖精钠标准溶液：精密称取0.0851 g经120℃干燥4 h后的糖精钠，置于100 mL容量瓶中，加2％碳酸氢钠溶解，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1 mg糖精钠。

 c.硫酸铜溶液（10％）。

  d.氢氧化钠溶液（4％）。

  e.盐酸（6 mol／L）：取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL。

  f.乙醚：不含过氧化物；无水硫酸钠；无水乙醇及95％乙醇。

 g.展开剂

    ① 苯：乙酸乙酯：36％乙酸（12:7:1）。

 ② 三氯甲烷：丙酮：甲酸（9:3:0.1）。

 h.显色剂

 ① 溴甲酚绿—溴甲酚蓝显色剂：称取0.1 g溴甲酚绿和溴甲酚蓝,加乙醇溶解并稀释至200 mL。

    ②0.04％溴甲酚紫：50％乙醇溶液，用0.1 mol／L氢氧化钠调至pH 8。

 i.硅胶（GF 254）；聚酰胺粉（200目）。

3．操作方法

（1）样品提取

   ① 液体：取10 mL均匀试样（如样品中含有二氧化碳，先加热除去。如样品中含有酒精，加4％氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去）。置于100 mL分液漏斗中，加2 mL 6 mol / L盐酸，用30，20，20 mL乙醚提取3次，合并乙醚提取液，用5 mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加2.0 mL乙醇溶解残留渣，密塞保存，备用。

 ② 固体、粉等：称取20.0g磨碎的均匀试样，置于200mL容量瓶中，加100mL水加温使溶解、放冷。加20 mL 10％硫酸铜溶液，混匀，再加4.4mL 4％氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静止30min。过滤，取50mL滤液置于150mL分液漏斗中，加2 mL 6 mol / L盐酸，用30，20，20 mL乙醚提取3次，合并乙醚提取液，用5 mL盐酸酸化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加2.0 mL乙醇溶解残留渣，密塞保存，备用。

（2）薄层板的制备

 ① 硅胶GF 254薄层板

   称取2g硅胶GF 254，加水调成糊状，涂成0.25～0.30mm厚的10cm×20cm或20cm×20cm的薄层板，稍干后，于110℃活化1 h，取出后置于干燥器内备用。

 ② 聚酰胺薄层板

   称取1.6 g聚酰胺，加0.4 g可溶性淀粉，加约15 mL水，研磨3～5 min，立即涂成0.25～0.30 mm厚的10 cm×20 cm的薄层板，室温干燥后，在80℃下干燥1 h。置于干燥器中保存。

（3）点样

   在薄层板的下端2cm处中间，用微量注射器点样，将200～400µL样液点成一横条状，条的右端1.5 cm处，点10µL糖精钠标准溶液使成一小圆点。

（4）展开

   将点好的薄层板放入盛有展开剂（①或②）的展开槽中，展开剂液层约0.5 cm，并预先已达到饱和状态。展开至10 cm，取出薄层板，挥干，硅胶GF 254板可在紫外光灯下观察。如喷溴甲酚绿一溴甲酚蓝显色剂，先将板在（90±5）℃干燥箱放10～15 min。斑点显黄色至蓝绿色。如用聚酰胺板，按GB／T 5009．29《食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法》操作。根据样品点和标准点的比移值进行定性，根据斑点大小进行半定量测定。将薄层板上样品中糖精钠的条状斑，连同硅胶GF 254或聚酰胺刮人小烧杯中，同时刮一块和样品条状大小相同的空白薄层板置于另一烧杯中做对照用。刮下的含糖精钠的吸附剂与对照吸附剂各加5.0 mL 2％碳酸氢钠溶液，50℃加热助溶，移人10 mL离心管中，离心分离（3000 r/min）20 min，取上清液备用。

（5）标准曲线制备

   吸取0，2.0，4．0，6.0，8.0，10.0mL糖精钠标准溶液，分别置于100mL容量瓶中，各加2％碳酸氢钠溶液至刻度混匀（每毫升分别相当0，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10 mg糖精钠）于波长270 nm测吸光度，绘制标准曲线。

（6）测定

   将样品离心液、试剂空白液，于波长270 nm分别测吸光度，与标准比较。

4．结果计算

X＝

式中

X-样品中糖精钠的含量，g／kg或g／L；

C_s1-测定用样品溶液中糖精钠含量，mg／mL；

C_s2-空白溶液中相当糖精钠含量，mg／mL；

m-样品质量或体积，g或mL；

V1-溶解刮下糖精钠时所用2％碳酸氢钠溶液体积，mL

V2-样品残留物加入乙醇的体积，mL。

V3-点样用样品乙醇溶液的体积，mL。

5．注意事项

   本方法可同时测定苯甲酸。样品提取、点板（在板上点10μL 0.1 mg／mL苯甲酸标准溶液）、展开等测定方法均同糖精钠的测定。紫外分光光度法定量时，从薄层板刮下的苯甲酸斑点，溶于10.0 mL 2％碳酸氢钠溶液中，取5．0 mL置于50 mL容量瓶中，加1 mL 6 mol / L盐酸，摇匀，加水稀释至刻度，于波长230 nm测吸光度。