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无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法

上一篇 / 下一篇 2008-12-03 17:15:38

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添加：lznyzr 来源：发布时间：2008-5-21 9:00:54

无公害食品麻痹性贝类毒素的测定生物法

-W0@/tj+_&m#?0

1、范围

[$? s_&qR-B*g U&z0
本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法——生物法。食品伙伴个性空间_q'oF,f%^+@J

9j8X~G#\T8HX@b0
\t%Zo!Yn0 本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素(PSP)的测定，其他贝类食品中PSP的测定可参照执行。食品伙伴个性空间,o9Q4{6wq

5[u|x WLE02、原理

%l\ n?@uK_5jQ0 根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每100g贝肉内的PSP的含量。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒素的总量。

;FD0gnr6?3j'jV;AB\0食品伙伴个性空间'\/~R-~H|
3、定义食品伙伴个性空间&I {,o2r6Z

食品伙伴个性空间9}_3[KQDPO
下列定义适用于本标准。食品伙伴个性空间+Y:LA;M,E2G L

食品伙伴个性空间SZCO9T
鼠单位 mouse unit，MU

对体重为20g的小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量。食品伙伴个性空间9bv yi$b}d

4、试剂

]IXU#W ha H0食品伙伴个性空间K_{t3usbP
4.1 盐酸溶液：0.1mol/L。食品伙伴个性空间;I;H'fk]]

@v.y3[ezm0
4.2 盐酸溶液：5 mol/L。

m6tM^f;ad04.3 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L。
q+djY&R3Q}7b2T0

,o#A5s BBPh6j04.4 麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准溶液：100μg/mL，经酸化，含有20％的乙醇作为保护剂，冷藏保存，无限期稳定。
T{,mI'ym0

8|c#G)aB.IcW05、仪器和设备食品伙伴个性空间o/`a]K;g

5.1 均质器。
;j.SDs1RznI1a`rsY0食品伙伴个性空间%x%R:v#`2V

{ i#[j$ruL a05.2 天平(感量0.1g)。
pB3D.{0I:c`-r0

,?N_{G05.3 离心机。
食品伙伴个性空间s;J$SzKt

k9Dx-^8].G(EM&|w05.4 pH计。
o;[vj*i5X0

dD8jy9v#MOVJ05.5 秒表。

H qajW6h'r0fM6K05.6 玻璃皿：烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等。

6{So#R!Ls#}&]05.7 注射器：1mL。
%K1m'N8[s iTcw0

5.8注射器针头：8＃。食品伙伴个性空间jndb s%Y

v/V"L/j"u]cuS05.9 小鼠：体重为19g～21g的健康ICR系雄性小鼠，若体重<19g或>21g，查表C.1的校正系数便可得到实际的死亡时间，体重>23g或已用过的小鼠则不能使用。
MJP!t*Q!pQo0

6、ICR系小鼠毒性单位的确定
{K.G l^&SlK q5K)@0食品伙伴个性空间(h PD?yW C

6.1 PSP工作标准溶液
PIFE#X8}w+Ex$xv:Q0

用移液管取100μg/mL Saxitoxin标准液1mL．于100mL容量瓶中，加入用盐酸酸化至pH为3的蒸馏水并定容。该液为lμg/mL Saxitoxin标准液，pH在2.0～4.0之间。在3℃～4℃条件下能稳定数周。
as_y(e0

qf3`|Exdb+gr06.2 测定用标准溶液
3N t*IF_0k0

分别用10mL、15mL、20mL、25mL和30mL水稀释10mL浓度为1μg/mL的Saxitoxin标准液，稀释液的pH应为2～4。
Z7wq9Cb C/C_0

TIggCf06.3 中值死亡时间的标准液选择食品伙伴个性空间/I8y)o#h%I%AK
食品伙伴个性空间 WL!MA6A2y

6.3.1 将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小鼠数只，选择中值死亡时间为5min～7min的浓度。如某浓度稀释液已达到要求，还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验。
4}4K8qx m ?$v~+@z0

E&^4X!Q*sc0 例如：用25mL水稀释的10mL标准液在5min～7min杀死小鼠，还需进行24mL＋10mL和26mL＋10mL的稀释度的试验。食品伙伴个性空间*EO-gG,S

M[P\N*O)c2{06.3.2 先将小鼠称重(精确到0.5g)，以10个小鼠为一组。用中值死亡时间在5min～7min内的各种浓度的标准稀释液两份(最好是三份)注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需死亡时间。
_/Wv7t0Bk0

v-j7C$e4at5Y06.3.3 记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s记为5s，8s记为10s(见附录B)。食品伙伴个性空间MoJcl

"cJp:S%tY%S06.4 毒素转换系数(CF)的计算

6.4.1 小鼠中值死亡时间的选择
F%L[]&L0

若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间<5min或>7min则弃去该组结果；若注射另一浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间在5min～7min，即使个别小鼠死亡时间<5min或>7min，也应使用该组的数据。但是若注射某浓度标准稀释液后，10只小鼠中有3只以上存活，则要另取10只小鼠进行重复试验。
W$SG$ohBfE [-q.|0

Kfe*AOEA z"}06.4.2 校正鼠单位(A)

;u8KB,|$}0v0 根据注射毒素后中值死亡时间为5min～7min的10只小鼠的个别死亡时间，由附录B分别查出鼠单位(M)，再由附录C查出小鼠的重量校正因子(是)，每毫升标准稀释液的校正鼠单位(A)按公式(1)计算。
ercb9yGa3K i0

A = k×M ……………………………………… (1)

Jr_^Uq2~q0式中：食品伙伴个性空间mFG(fc:}3D
食品伙伴个性空间'\-o_8E5U({;n

8dk y B'B Bf0 A — 校正鼠单位(MU)；食品伙伴个性空间 Gw-WL'v

M — 鼠单位(MU)；食品伙伴个性空间%`K%VO,CY~

w`S;~"E,D D&u0 K — 小鼠的重量校正因子。食品伙伴个性空间f]Y(iQm

6.4.3 毒素转换系数(F)
食品伙伴个性空间5Y3i`m-M0jd

毒素转换系数(F)按公式(2)计算。食品伙伴个性空间:Z^y7[N(b"}

F = C/A ……………………………………… (2)
G YWwD0SJ0

式中：
6\gDV%V5tE0食品伙伴个性空间Cq+ZpTX'Q

6r/PlgaF0w|l0 F — 毒素转换系数；食品伙伴个性空间{iAg,u,K|&g

C — 每毫升实际毒素含量(μg SAX/mL)；

;B*AL)N Y^C|0 A — 校正鼠单位(MU)。

6.4.4 计算每组10只小鼠的平均毒素转换系数值(f),再计算各组间的平均毒素转换系数值(F)，并以此为标准做常规检测。6.5 毒素转换系数(F)值的定期检查
-lXxPDU:^W{0食品伙伴个性空间*A0aDKV&n z

$^z/c6@G5h8?p3dQ%~06.5.1 如PSP检测间隔时间较长，每次测定时要用适当的标准稀释液注射5只小鼠，重新测定F值。如果一周有几次检测，则用中值死亡时间5min～7min的标准稀释液每周检查一次，测得的歹值应在原测定F值的±20％范围内。
;H)f)vgt,n+@z7Gi0食品伙伴个性空间(oh:\3B$Y6|&h

6.5.2 若结果不符，用同样的标准稀释液另外注射5只小鼠，综合先前注射的5只小鼠结果，算出f值。并用同样的标准稀释液注射第二组10只小鼠，将第二组求出的f值和第一组的f值进行平均，即为一个新的F值。
{/fK1RQi0

6.5.3 重复检查的F值通常在原结果的±20％之内，若经常发现有较大偏差，在进行常规检测前应调查该方法中是否存在未控制或未意识到的可变因素。

[8njWY^L07、样品的测定食品伙伴个性空间8e1_J} d%C|z1H

`5@yc;\9U1@ gD07.1 检样的制备食品伙伴个性空间^[/Hk[5k:G-N
食品伙伴个性空间u*r~"S,KiA

7.1.1 牡蛎、蛤及贻贝食品伙伴个性空间r0`5c#yQ

Wf-YH-Qv0 用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。收集贝肉沥水5min(避免贝肉堆积)，捡出碎壳等杂物，将贝肉均质。开壳前不能加热或用麻醉剂。食品伙伴个性空间 T|(Wt6^$a

7.1.2 扇贝
Q#C1^ `e0食品伙伴个性空间)za!Pv1~VRE

取可食部分(闭壳肌)用作检测。沥干及均质过程同7.1.1的规定。食品伙伴个性空间\$fV&}I d
食品伙伴个性空间qk0MGg1p2_

7.1.3 贝类罐头
食品伙伴个性空间K$|d6S9t

将罐内所有内容物(包括贝肉组织及汁液)于均质器中均质。食品伙伴个性空间DmA ~0p,p5I
食品伙伴个性空间5R;h ?#w9EVh

大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质。

7.1.4 冷冻贝类食品伙伴个性空间 S2u;uH){

在室温下，使冷冻的样品(带壳或脱壳的)呈半冷冻状态，按7.1.1规定的方法清洗、开壳、淋洗、取肉、均质。
8c"LT]%b6?S-d G0

7O F(n.UtD"|?07.2 提取

7.2.1 取100g按7.1处理的样品于800mL烧杯中，加0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌，检查pH(pH应为2.0～4.0)。需要时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱时速度要慢，同时需不断搅拌，防止局部碱化破坏毒素。

7.2.2 将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温，调节pH至2.0～4.0(切勿>4.5)。将混合物移至量筒中并稀释至200mL。食品伙伴个性空间(?maSX

]9X~^J07.2.3 将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可，必要时将混合物或上清液以3 000r/min离心5min，或用滤纸过滤。保留进行小鼠注射用的足量液体。
食品伙伴个性空间T!R5gH{%^4f

7.3 小鼠试验食品伙伴个性空间)m/T r1Pa1@['E

X`,d!T/wU'~CH07.3.1 以感量为0.1g的天平将小鼠称重并记录重量。每个样品注射3只小鼠。食品伙伴个性空间8pg7R&L k+A

7.3.2 对每只试验小鼠腹腔注射1mL提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。
D7vT?}7[%K_b0

7.3.3录注射完毕时间，仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间(到小鼠呼出最后一口气止)。食品伙伴个性空间;j cP*H)@

?o)bKU"\y'b07.3.4 若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样品的毒力。

r fZ2@(q_07.3.5 若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提取液后，再注射另一组小鼠(3只)，得到5min～7min的死亡时间；稀释提取液时，要逐滴加入0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液，调节pH至2.0～4.0。食品伙伴个性空间4QaO#Y-rp
食品伙伴个性空间2~KiJ B-b

)FR'M_9Op,j5cO08、结果的计算与判断
#H8y n6w3zW0yVq0食品伙伴个性空间5e$E F:ff n

8.1 毒力的计算
;H*tT$W+K$O,f:F0

O\b `,x;eB.[z6y.U08.1.1 根据小鼠的死亡时间，在附录B中查出相应的每毫升注射液的鼠单位数M，将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于<0.875MU。

8.1.2 若试验动物重量<19g或>21g，则根据附录C查出重量校正系数k。

8.1.3 样品中PSP的含量按公式(3)计算。
#fA+u9P4ms0食品伙伴个性空间o8L,o4oU

…………………………(3)

+ql#DK NNE0式中：食品伙伴个性空间1_ xoQR.`@

X — 样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位(MU/100g)；食品伙伴个性空间*k!tgu&OL/@
食品伙伴个性空间$Zs/c$z_;X[

ki — 每只小鼠的重量校正系数；
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Mi — 每只小鼠的鼠单位数，鼠单位(MU)；食品伙伴个性空间!MpLDwA
食品伙伴个性空间+d9H!KG`(k;|

`kV|wR0 D — 样品提取液的稀释倍数；食品伙伴个性空间5v9zlB:A,\I
食品伙伴个性空间;B5u.vd-aD^

$X O:Ba]$v _0 200 — 样品量，克(g)。