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无菌检查法

上一篇 / 下一篇 2006-08-16 20:32:56 / 天气: 晴朗 / 心情: 高兴

川流不息

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无菌检查法食品伙伴个性空间3d!kh~5^9|-d

%N({]!Uq iS5_0     无菌检查法
^W Y'qP4s qS0  附录Ⅺ H 无菌检查法
HL7{TX@7xy,R0  无菌检查法系指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。
0N|/}&C(^u0无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。单向流空气区与工作台面，必须进行洁净度验证。生物制品的无菌检查，应按《中国生物制品规程》中有关无菌检查的规定办理。
Yq VZ'`"fJ)aeB)V0   培养基及其制备方法
I7g@.\{ci0   培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。以下培养基制备时，均以115℃灭菌30分钟。
*jv8A'NKk9a+l%S01.需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐流体培养基)
酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g
#OIGRuG8_0葡萄糖 5g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0ml
L－胱氨酸 0.5g (或新配制的0.2％亚甲蓝溶液0.5ml)
*]&lsx-X,NH0硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g
}.}WbONO0(或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml食品伙伴个性空间h*?6XIa5Gl
酵母浸出粉 5g
Wn'Sx9NY3jET9F0除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装，灭菌。在供试品接种前, 培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则,须经水浴煮沸加热, 只限加热一次。食品伙伴个性空间U5G0j7OI9Ql]
2.真菌培养基
D4G+pB5fk0胨 5g 　　　　　磷酸氢二钾 1g 酵母浸出粉 2g 硫酸镁 0.5g 葡萄糖 20g 水 1000ml
'm @m4E9K]7c\0除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH值约为6.8，煮沸,加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，灭菌。
(?,eD#I{L+q+C7?L03.选择性培养基
(1) 对氨基苯甲酸培养基（用于磺胺类药物的无菌检查）照上述需气菌、厌气菌培养基及真菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后，摇匀,分装,灭菌。
` zS,Tyjb3Q"G2Q0(2) 聚山梨酯80培养基（用于油剂药品的无菌检查）照上述需气菌、厌气菌培养基及真菌培养基的处方及制法，各加10ml聚山梨酯80，摇匀，分装，灭菌。
xO$IG-T'~A04.营养肉汤培养基食品伙伴个性空间IG-fhy+?g
胨 10g 肉浸液 1000ml 氯化钠 5g
取胨和氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。
:j/H"]Uv ys&Ow05.营养琼脂培养基
0Z9Fl4T2Zm}0h0照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。
6.0.5％葡萄糖肉汤培养基
.]&fmd!Q_0胨 10g 葡萄糖 5g 氯化钠 5g 肉浸液 1000ml
取胨和氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。食品伙伴个性空间 WHHc#[~
　　7.真菌琼脂培养基
;UMx)| QV0照真菌培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2,分装，灭菌，趁热斜放使凝固成斜面。
上述培养基分别按15ml与40ml或需要量分装于试管功其他容器中，装量约为试管或容器高度的2/5，按规定的温度和时间灭菌。细菌培养基经30～35℃培养48小时,真菌培养基经20～25℃培养72小时后，应无菌生长。

【附注】肉浸液制备法取新鲜牛肉，除去肌腱及脂肪，切细，绞碎后，每1000g加水3000ml，充分拌匀，在2～10℃浸泡20～24小时，煮沸1小时，滤过，压干肉渣,补足液量，分装，灭菌，置冷暗处备用。也可用牛肉浸出粉3g，加水1000ml，配成溶液代替。
培养基质量应通过灵敏度检查。
i7Xee!]$m'G5\;w0 培养基灵敏度检查法
1.菌种 (1)藤黄微球菌(Micrococcus Luteus)[CMCC(B)28001] 食品伙伴个性空间 \O0?$Zu`
(2)生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941]
J*doN3IT*Zr0(3)白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]　　　　　　　　　　　　
l0P_(Bea l{,i,Rl02.操作 (1)取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物,分别用0.9％无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸入无菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用0.9％无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。分别取上述菌悬液,用0.9％无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度, 然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10～100个菌并计数。　　　　　　　　　　　　　

(2)将藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物,白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释,制成1ml中含10～100个菌并计数。将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为12ml的需气菌、厌气菌培养基3管,白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀释菌液各1ml,接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管,以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
Hdf)a.CR'B$BV ~3]03.结果判定以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。食品伙伴个性空间@"gzy }J
对照用菌液食品伙伴个性空间8m)]$wzI2ci8|
1.金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）菌液取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1