（1）山梨酸及苯甲酸的测定
方法一：气相色谱法
1. 原理
试样酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。
2. 仪器和试剂
（1）仪器设备
气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。
（2）试剂
乙醚：不含过氧化物；石油醚沸程30～60℃；盐酸；无水硫酸钠；盐酸（1十1）：取lOOmL盐酸，加水稀释至200mL。
氯化钠酸性溶液：40g／L。于氯化钠溶液（40g／L）中加少量盐酸（1+1）酸化。
山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0．2000g，置于lOOmL容量瓶中，用石油醚一乙醚（3+1）混合溶剂溶解后并稀释至刻度。此溶液含山梨酸或苯甲酸醚（3+1）混合溶剂稀释至含山梨酸和苯甲酸各50，100，150，200，250mg／mL。
3. 实验步骤
（1）试样提取：称取2．50g事先混合均匀试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸（1+1）酸化，用15mL，10mL乙醚提取两次，每次振摇lmin，将上层乙醚提取液吸人另一个带塞量筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液（40g／L）洗涤两次，静止15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚一乙醚（3＋1）混合溶剂溶解残渣，备用。
（2）色谱参考条件：
a.色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5％DEGS+1％H3P04固定液的60～80目Chromosorb W AW。
b.气流速度：载气为氮气，50mL／min（氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。
c.温度：进样口230℃；检测器230℃；柱温170℃。
（3）测定：进样2µl标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样2µl试样溶液，测得峰高与标准曲线比较定量。
4. 结果计算
式中：
X—试样中山梨酸或苯甲酸的含量，mg / kg；
A—测定用试液中山梨酸或苯甲酸的质量，µg；
V1—加入石油醚一乙醚（3+1）混合溶剂的体积，mL；
V2—测定时进样的体积，μL；
m—样品的质量，g；
5—测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；
25—试样乙醚提取液的总体积，mL；
由测得苯甲酸的量乘以1.18，即为试样中苯甲酸钠的含量。
5．允许差 重复性条件下两次测定结果的相对相差不超过10％
方法二：层析法
1. 原理
样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸。将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上山梨酸、苯甲酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略2. 仪器和试剂
（1）仪器设备
吹风机；层析缸；玻璃板：10 cm×18 cm；微量注射器：10μL，100µL；喷雾器。
（2）试剂
a.异丙醇；正丁醇；石油醚：沸程30～60℃；乙醚（不含过氧化物）；氨水；盐酸（6 mol／L）：取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL；无水乙醇；聚酰胺粉（200目）。
b.山梨酸标准溶液：精密称取0.2000 g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2 mg山梨酸。
c.苯甲酸标准溶液：精密称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移人100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2 mg苯甲酸。
d.展开剂
①正丁醇—氨水—无水乙醇（7:1:2）。
②异丙醇—氨水—无水乙醇（7:1:2）。
e.显色剂：0.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液，用0.1 mol／L氢氧化钠溶液调至pH8。
f.4％氯化钠酸性溶液：于4％氯化钠溶液中加少量6 mol／L盐酸酸化。
3．操作方法
（1）样品提取
称取2.5 g事先混合均匀的样品，置于25 mL带塞量筒中，加0.5 mL 6 mol／L盐酸酸化，用15，10mL乙醚提取两次，每次振摇l min，将上层醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3 mL 4％氯化钠酸性溶液洗涤两次，静止15 min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人25 mL。容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。吸取10.0 mL乙醚提取液分两次置于10 mL带塞离心管中，在约40~C的水浴上挥干，加入0.10 mL乙醇溶解残渣，备用。
（2）测定
①聚酰胺粉板的制备
称取1.6 g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15 mL水，研磨3～5 min，立即倒入涂布器内制成10 cm×18 cm，厚度0.3 mm的薄层板两块，于室温干燥后，于80℃干燥1 h，取出，置于干燥器中保存。
②点样
在薄层板下端2 cm的基线上，用微量注射器点1μL，2μL样品液，同时各点1 μL，2μL山梨酸、苯甲酸标准溶液。
③展开与显色
将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10 cm，取出挥干、喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量（山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82，0.73）。
4. 结果计算
式中：
X－样品中山梨酸（苯甲酸）的含量，g／kg；
ms－测定用样品液中山梨酸（苯甲酸）的含量，mg；
m—样品质量，g；
V1—加入乙醇的体积，mL；
V2—测定时点样的体积，mL。
10—测定时吸取乙醚提取液的体积，mL；
25—样品乙醚提取液总体积，mL，
