求教一下有关实验室杀菌锅的杀菌效果验证知识
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weixvefei2008发布于2007-07-19 09:10:55
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杀菌后的培养基37摄氏度培养24小时.
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yiyunting发布于2007-07-19 09:15:11
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我们就是用化学指示卡，放到灭菌锅内，最后只是颜色能达到标准黑色就可以了
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wenyang76
发布于2007-07-19 09:31:41
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对，直接买化学指示卡即可，每次消毒都要作为质控，而且要有消毒记录。
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shppm发布于2007-07-19 18:22:31
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灭菌效果验证肯定要用生物指示条的 化学指示条只用来监控每次灭菌效果 不能用来做验证
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tangliangzi发布于2007-07-19 20:10:11
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灭菌锅的验证有国家标准的,即灭菌锅国家验证规程.是用嗜热脂肪芽胞杆菌做为指示菌,检验是否将其杀死.因此灭菌锅的期间核查或验证均可以采取其中的方法.具体的验证方法在网上应该可以查到.
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yuanzhou
发布于2007-07-19 23:47:49
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”灭菌锅国家验证规程“？好象没这样的文件呢。我在网上搜索了一下，没找到。
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yuanzhou
发布于2007-07-19 23:53:47
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“用嗜热脂肪芽胞杆菌做为指示菌,检验是否将其杀死。”这是正确的。
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hyying发布于2007-07-20 10:18:04
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在灭菌锅开始灭菌前放入含嗜热芽孢杆菌的生物指示剂（是一支小管，里面有培养液和菌），灭好菌后将生物指示剂56摄氏度培养48小时，同时做空白对照，就是没灭菌的生物指示剂，培养好后观察结果，阳性黄色，阴性不变色（紫色），空白是黄色。
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dycdcwjc发布于2007-07-20 10:44:57
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检测方法：可以按国标GB15981-1995进行.现简单说明如下:
1、先将含嗜热脂肪芽胞杆菌的生物学指示管放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包或通汽贮物盒的中心部位。
2、布点：在灭菌柜内的上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包，共三个标准试验包；手提式压力蒸汽消毒器使用通汽贮物盒代替标准试验包，将通汽贮物盒平放于手提式压力蒸汽消毒器的底部。
3、经过一个灭菌周期后，取出标准试验包或通汽贮物盒内的指示管：若为生物学指示管，应置于56℃培养48h后，通过观察指示管颜色变化来判定结果；若为化学指示管，可通过观察指示管颜色变化或是否熔化来判定结果，使用化学指示管只能作为灭菌合格的参考标准。
标准试验包：由3件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，1块大手术巾，30块10 cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25 cm×30cm×30cm大小的消毒包，放有指示管的小纸袋应置于标准试验包的中心部位。
通汽贮物盒：大小为22 cm×13cm×6cm，盒内盛满中试管，指示管放于中心部位的试管内，试管口用灭菌牛皮纸包封。
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李延
发布于2007-07-20 10:47:05
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GB15981-1995灭菌和消毒效果评价标准
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李延
发布于2007-07-20 10:50:53
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我有GB15981-1995灭菌和消毒效果评价标准，但不知如何发上来，请教各位。
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李延
发布于2007-07-20 10:54:33
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中华人民共和国国家标准
消毒与灭菌效果的评价方法与标准Gs 15981一1995
Evaluating method and standard for the efficacy
of d is in fe ct io n an d sterilization
第一篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准
1 主题内容与适用范围
本 方 法 规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。
本方 法 适 用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。
2 试剂
本标 准 所 用试剂，凡未说明规格者，均为分析纯(AR)，水为蒸馏水。
2.1 蛋白陈。
2.2 葡萄糖。
2.3 澳甲酚紫酒精溶液:取澳甲酚紫2.og ,溶于100mL95%乙醇中。
2.4 漠甲酚紫蛋白膝水培养基配制:蛋白陈10.0g ,葡萄糖5.og ，溶于1000mL蒸馏水中，调pH值至
7.0- 7.2 ，然后再加2%澳甲酚紫酒精溶液0.6n L,摇匀后，按5mL/管，分装包口，置压力蒸汽灭菌器
中，于115 C灭菌40min后备用。
3 指示菌
嗜热 脂 肪 杆菌芽胞(ATCC 7953或SSIK 31)菌片，含菌量为5X 1 0'-5x1 0`cf u/片，121C 下，杀灭
90YO微生物所需时间D_值为1. 3 ^-1. 9min，杀灭时间(KT值)为(19min，存活时间(ST值)为)
3. 9min.
4 化学指示剂
需用 卫 生 部批准的化学指示剂。
5 技术要求
压力蒸汽灭菌器压力，MP./cm, 温度，C 灭菌时间，min
下排气式
钊30
预真空式
0.070
0.105
0.210
115
121
134 4- 6
国家技术监督局1995一12一15批准1996一07一01 3M
GB 15981一1995
6.1
检测方法
生物 学指标(用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据)。
6.1.1 将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放人灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。
6.1.2 灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣，4块小
手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块1OcmX l Ocm,8 层纱布敷料包裹成25cmX 3 0cmX 3 0cm大
小)。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒(22cm X 13cm X 6cm)代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示
菌片放于中心部位两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封)，将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。
6.1.3 经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入嗅甲酚紫
葡萄糖蛋白陈水培养基中，56℃培养48h，观察培养基颜色变化。
6.2 化学指标
在物 品 包 外用化学指示胶带，可作为物品是否经过灭菌的处理标志。在物品包内中心部位用化学指
示剂，可作为物品是否灭菌的参考标志。
了结果判定及评价
了.1 同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的澳甲酚紫蛋白陈水培养基全部不
变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的澳甲酚紫蛋白陈水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌
不合格。
7.2 化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时，或熔化时作为灭菌合格的参考标准。
第二 篇 紫 外 线 表 面 消 毒 效 果 评 价 方 法 与 标 准
8 主题内容与适用范围
本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测
方法。
本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。
9 指示菌
9.1 大肠杆菌(8099或ATCC 25922)0
9.2 枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372).
10 物理学指标
10.1 在电压220V时，普通30W直管型紫外线灯，在室温为20^25℃的使用情况下，253.7n m紫外线
辐射强度(垂直lm处)应)70pW / cm'o
10.2 在电压220V时，高强度紫外线灯，在室温为20-25'C的使用情况下，253. 7nm紫外线辐射强度
(垂直lm处)应)200PW/cm2a
10.3 照射剂量按式(l)计算:
剂量 (pw "s /c m` )二 强 度 ( pW /c m ') X 时 间 ( s) ·· ··· ··· ··· ··· ··· ····.. (1)
11 检测方法
们.1 物理学检测方法
11.1.1 灯管的紫外线强度(pW / cm')用中心波长为253.7n m的紫外线强度测定仪(标定有效期内)，
在灯管垂直位置lm处测定。
GB 15981一1995
11-1.2 在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对象的实际距离测定。
11-1.3 表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到20 000
kW·,/cm'，对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到100 OOOPW.s/cm',
11.2 生物学检测方法
11.2.1 采用载体定量消毒试验。载体制备按本标准附录C进行。
11-2.2 开启紫外线灯5min后，将8个染菌玻片平放于灭菌器皿中，水平放于适当距离照射.于4个不
同间隔时间各取出2个染菌玻片，分别投人2个盛有5mL洗脱液(1%吐温80.1%蛋白陈生理盐水)试
管中，振打80次。
11.2.3 经适当稀释后，取。.5mL洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，放37℃培养48h作活
菌计数。
112.4 阳性对照，除不作照射处理外，取2个染菌玻片分别投入a个盛有5mL洗脱液中振打80次，
余按4.2.3进行
11.2. 5 计算杀灭率
杀灭率(%)=阳性对照回收菌数一试验组回收菌数
x 100.....................(2)
判定标准
对指示菌杀灭率)99.9%判为消毒合格。
达物理学检测标准时，作为消毒合格的参考标准。
1212112
第三篇液体消毒剂消毒效果评价方法与标准
13 主题内容与适用范围
本方 法 具 体规定了消毒剂消毒效果生物学检测方法及其评价标准。
本方 法 适 用于消毒剂对各种物体的消毒效果评价。
14 理化指标
将消 毒 剂 置20士2C水浴中，测定在使用浓度下杀灭指示微生物达到消毒或灭菌所需的最短时间
(min)
指示微生物
细菌
细菌 繁殖体:金黄色葡萄球菌(ATCC6 538)、大肠杆菌(8099或ATCC2 5922).
细菌芽胞:枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9732)
111.2
巧151515
15.2 真菌:白色念珠菌(ATCC 10231)
15.3 乙型肝炎表面抗原:纯化抗原(1.Omg/mL).
检测方法
中和 试验(见附录A),
消毒剂定性消毒试验(见附录B),
消毒剂定量消毒试验(见附录C),
消毒剂杀菌能量试验(见附录D),
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性破坏试验(见附录E)e
闷.. 自乙QJ ‘q ‘J
6 e 已6. 已巳
月.. Jl月月.. 月.. 月.， J.‘
GB 15981一1995
消奎效果评价标准
1 对细菌和真菌的杀灭率>-99.9yo，对HBsAg，将检测方法灵敏度10‘倍或5X10‘倍(载体试验)
HBsAg抗原性破坏，可判为消毒合格。
对枯草杆菌黑色变种芽胞全部杀灭，可判为灭菌合格。
在实际应用中消毒效果评价以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为该消毒剂达到实用消毒
17 17 的17
17.3
所需的浓度和时间。
GB 15981一1995
附 录 A
中和荆中和效果试验
(补 充 件 )
A1 内容提要
为 了准 确 评价消毒剂对微生物的杀灭作用，消毒试验中要求选择适当中和剂。所选中和剂不仅能及
时中止消毒剂的杀微生物作用，且中和剂本身及其与消毒剂的反应产物(下称中和产物)尚需对微生物
无抑制或杀灭作用，对培养基无不良影响。
A2 培养基和试剂
A2.， 营养琼脂培养基
成分 : 蛋 白陈 10. oo g
牛肉 膏 3. OO g
氯化 钠 5. OO g
琼 脂 1 5. OO g
蒸馏 水 10 00 .OO m L
制法 :除 琼脂外，其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2 7.4，加入琼脂后加热溶解
121 C、压力蒸汽作用30min，灭菌后备用。
A2.2 0.03mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2 ^-7.6 ，下称PBS).
成分 : 磷 酸氢 二 钠 2.8 4 g
磷酸 二 氢 钾 1 .3 6g
蒸馏 水 1 00 0. OO M I,
制法 :将 磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解于蒸馏水中，pH为7.2 -7.4 ,分装，经121'C,
汽灭菌后备用。
，过滤分装，经
30min压力蒸
A3 器材
Al 1 锥形烧瓶。
A3.2 平皿(直径9cm) o
A3.3 量筒
A3.4 精密pH试纸。
A3.5 无菌试管。
A3.6 无菌刻度吸管(1.0 ,5.0 ,10.Om L),
A3.7 恒温培养箱。
A3.8 冰箱。
A3.9 菌落计数器。
A3.10 酒精灯。
A4 中和剂(注明生产厂家，批号)
A5 操作方法
A5.1 用PBS将指示菌制成5 X 105^-5 X 106 cfu/mL悬液。
GB 15981一1995
A5. 2 将消毒剂用灭菌蒸馏水配制成3种不同浓度，在不加中和剂的情况下，测知该消毒剂1Om in抑
杀指示菌99. 9%以上的最低有效浓度。
A5.3 取消毒剂lOm in抑杀指示菌的最低有效浓度与待选择中和剂进行试验，选出中和剂种类并依据
等当量中和原则，调整中和剂浓度，选出试验浓度的消毒剂使用中和剂的浓度
A5.4 中和剂选择试验时，先将消毒剂1.Om L与中和剂溶液9.Om l混合，制成中和产物溶液，再按表
Al分组进行。
表 A 1 中 和 剂 选 择 试 验
组号0.sm工菌液加于
混 匀
作 用
lO m en
取0.5.1混匀液加入:
(加入后总量为5.1)
作用l Omin后，取原液或稀释液
0.5.工接种平板(2个/样本):
l 消毒剂4.5.1 PBS 4.5 m!. 原液,X10
2 消毒剂4.smL 中和剂4.5.1, 原液，X10
3 中和产物4.5m !, PBS 4.5 m1. X 100,X 1000
4 P13S 4. 5.1 PBS 4. 5m! X 100, X 1000
5 中和剂4.5.1, PBS 4.5m1. 火100,X 1000
6 Pi3S 5. OmL 原液
然后 ，倾 注平板段37C 培养48h，计数菌落数，按稀释倍数计算出回收菌数(cfu/ml.)
A6 中和试验结果报告方法(如表A2)
表A2 中和试验结果举例
中和剂
各组回收菌落数,du/ml, 3,4,5组间
1 2 3 4 5 6 误差率，%
1%卵磷脂
1洲卵磷脂十0.1%吐温80
1%吐温80
。.5%硫代硫酸钠
0 7 08 4 .6 7X 10` 4.83K10` 4.1 1火100 0
0 7 94 5 .81火10` 5.8 9只10" 5.7 8火10, 0
0 1 94 3 .3 1X 10` 5.31X106 5.2 1又10` 0
0 1 32 3 .20X100 5.03X10` 5.18X10` 0
6.27
0. 72
18. 17
18. 94
3,4,5组间误差率计算公式
。、*，。、(I三组均数一3组菌数}+}三组均数一4组菌数i+}三组均数一5组菌数1)- 3,
I天迷己勺，、义。少牛— 一---户书a百岌花买一一一~一~一— -一— /, 1vv
一 习 工 j 刁 文 月
( A 1 )
A7 判定标准
A7门3,4,5组菌数相似，其误差率(10/。
A了.2 6组无菌生长。
A7.3 2组菌数明显少于3,4,5组。
A7.4 1 组 不 长菌或明显少于2组。
符 合上 述 标准的中和剂表明可消除消毒剂对指示菌的作用，中和剂及其与消毒剂的中和产物对指
示菌无毒害，判定为该消毒剂的中和剂。
A8 消毒试验用中和剂浓度的选择
按 A 5. 4 步骤进行，按A7.1 -7.4 的标准判定。
GB 15981一1995
附 录 B
消毒荆定性消毒试验
(补 充 件 )
B1 内容提要
定性 消毒 试验是测定受消毒因子作用后的样本有无细菌生长的试验方法。用于对消毒因子灭菌效
果的鉴定和消毒剂杀灭细菌效果的初步评价。
B2 培养荃与试荆
82.1 普通肉汤培养基
B2_1. 1 成分蛋白陈10.oo g
氯化 钠 5. OO g
肉浸 液 10 00 .O O m L
B2.1.2 制法:取蛋白炼、氯化钠加入肉浸液内，微温溶解，调节PH至弱碱性，煮沸、滤清，调节PH使
灭菌后为7.2- 7.4 ，压力蒸汽灭菌备用。
2 试剂
2.1 稀释液;含1%蛋白炼的0.03 mol/LP BS( PH 7.2-7.4) .
2.2
2.3
器材
灭菌蒸馏水。
中和剂:按本标准附录A选择。
:
OL 八工J 门乙八7L ，J
B B B B B
灭菌刻度吸管(1.0 ,5.0 ,10.Om L),
灭菌试管。
灭菌三角烧瓶。
酒精灯。
1=温水浴箱。
恒温培养箱。
.l qL 勺J 月H 七J 只U
. … ， .
，J ，J qJ 住J 气工J I.︸
B B B B B B
B4 试验方法
B4.1 将菌液进行活菌计数，并用稀释液配制成含菌量为5 X 10s^-5 X 10`cfu/mL的菌悬液。
B4. 2 将灭菌试管10支排列于试管架上，标记管号。
B4. 3 每个试管加灭菌蒸馏水2. 5mL，放2。士2℃水浴中。
B4.4 于第1管内加适当浓度消毒液2.5m L，混匀后取2.5m L移入第2管，再次混匀，从第2管中取
2.5m l移入第3管，以此类推至第9管，混匀后弃去2.5m L，第10管中不加消毒液作对照。
B4.5 加菌悬液2.5m L于各管中，混匀并记录各管加菌时间，使菌药混合液中含菌量均为101-101
cfu/mL
B4.6 各管分别于加菌后4个不同间隔时间，取出0.5m L，加入4.5m L中和剂内，中和10min后，取出
0. 5ml_加入4. 5mL营养肉汤管内。
B4. 7 将接种细菌的肉汤管放37 0C培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7天。
B4.8 试验重复5次。
GB 15981一1995
B5 结果判定
B5.1 若肉汤管混浊，则表示有菌生长，记为阳性，以(+)表示。
B5,2 若培养至第了天，肉汤管澄清。则表示无菌生长，记为阴性，以(一)表示。
B5.3 对难以判定的肉汤管，取。1mL接种于营养琼脂平板，用灭菌I棒涂匀，放37'C培养48h，观察
菌落形态;并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长。有指示菌生长记为阳性。
BS.4 5次试验，均无指示菌生长表示达到灭菌
附 录 C
消毒剂定量消毒试验
(补 充 件 )
C1 内容提要
定 Ili消 毒 试验是测定受消毒因子作用后，样本残存微生物数量的试验方法，以杀灭率表示结果。用
于对消毒剂杀灭效果的评价。
C2 培养基与试剂
C2门普通营养琼脂培养基:按本标准A2. 1制备。
C2.2 试剂
C2.2. 1 稀释液:含1%蛋白陈的0.03 m ol/LP BS( pH 7.2- 7.4)o
C2.2.2 灭菌蒸馏水。
C2.2. 3 中和剂:按本标准附录A选择。
C2.2.4 0.03mol/I.P BS (pH 7.2 ^-7.4),
C2.2. 5 洗脱液:含中和剂I%蛋白陈、。.I%吐温80的PBS,
C3 器材
C3.1 灭菌刻度吸管(1.0,5.0,10.OmL),
C3.2 灭菌试管。
C3.3 灭菌三角烧瓶。
C3.4 灭菌平皿(直径为9 cm),
C3.5 恒温水浴箱。
c3.6 恒温培养箱。
C3.7 酒精灯。
C3.8 菌落计数器。
C3.9 微量进样器。
C3.10 载体:根据需要及试验目的选用经脱脂处理0.5c mX 1 .Oc m大小的布片、纸片、玻片、橡胶片、塑
料片、不锈钢片或铝片。
C4 试验方法
C4门定量悬液试验
C4.1.1 将菌液进行活菌计数，并用稀释液稀释成含菌量为5X 1 05^-5X 1 0`cf u/mL的菌悬液。
C4.1.2 将消毒剂用灭菌蒸馏水稀释成3个不同浓度，各吸取4. 5mL分别加入三个试管内，放20士
Gs 15981一1995
2C水浴中。
C4.1. 3 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，在三个试管中分别加入0. 5mL菌悬液(含菌量为5X
10`'^5 X 10` cfu/mL)，混匀并开始记时。
C4门.4 分别于4个不同间隔时间，各取0.5m L菌液混合液移入4.5m L中和剂中混匀。
C4.1.5 中和1Om in，作适当稀释后进行活菌计数，
C4.1.6 阳性对照以洗脱液代替消毒液.同时按C4.1.2- C4.1. 5 进行。
C4.1.7 按不同稀释度推算出每个样本存活菌数(cfu /mL)，按式(C1)计算杀灭率:
杀灭率(%)=
对照组存活菌数一试验组存活菌数
对照组存活菌数
X 100 .................. (C1)
C4.1.8 试验重复5次。
C4.2 载体定量试验
C4. 2.1 将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注定量菌液(载体回收菌量达5X105^5X10s
du/片)，涂匀，放37℃培养箱待干。应用市售染菌载体时，回收菌量亦应达5X 1 05---5X 1 0`cf u/片)。
C4.2. 2 用灭菌蒸馏水将消毒剂稀释成3个不同浓度，各吸取5mL分别加入三个试管内，放2。士2C
水浴中。
C4.2. 3 待试管内液体温度与水浴温度平衡后，加入染菌载体，作用至规定时间，将染菌载体移入含中
和剂的5mL洗脱液试管内，中和lOm inI振 打80次，适当稀释，接种两个平板。放37℃培养24-48h，进
行活菌计数
C4.2. 4 阳性对照，以洗脱液代替消毒液按C4.2. 2- C4.2. 3 进行。
C5 结果判定
1 5次试验的杀灭率均)99.9 %判为消毒合格。
2 对枯草杆菌黑色变种芽胞5次试验均全部杀灭判为消毒合格。
附 录D
有机物保护试验
(补 充 件 )
D1 内容提要
有机 物 保 护试验是测定消毒剂对有机物保护条件下的微生物的杀灭作用，以杀灭率表示之，其结果
与该消毒剂定量消毒试验相比较，用于评价有机物对消毒剂的杀菌能力的影响。
D2 培养荃与试剂
D2.1 普通营养琼脂培养基，按本标准A2.1制备。
D2.2 试剂:
D2.2. ， 稀释液:同C2.2.1 ,
D2.2. 2 灭菌蒸馏水。
D2.2.3 中和剂:按本标准附录A进行选择。
D2.2.4 0.03mol/L磷酸缓冲液(pH7.2 -7.4 )(简称PBS),
D2.2. 5 洗脱液:含1%蛋白陈,0.100吐温80的生理盐水。
D2.2. 6 小牛血清加入菌悬液中，使其最终浓度为10%.
GB 15981一1995
n3 器材
同本 标 准 C3.
D4 试验方法
D4.1 实验前预先将菌液进行活菌计数，用稀释液稀释，加入小牛血清，使其最终含血清量为10%，含
菌数为5 x 10'-5X 1osciu/m[，以此作为试验菌悬液。
D4. 2 以下步骤同本标准C4. 1. 2-C4.1. 8e
D5 结果判定
D5门5次试验的杀灭率均大于99. 9%所需最低浓度和最短时间，判为该消毒剂在有机物存在下，可
以达到消毒的有效浓度和时间。
D5.2 此有效浓度和时间与定量消毒试验达到消毒的有效浓度和时间相同或相近，判为有机物对消毒
剂杀菌作用无明显影响。达到消毒最低有效浓度增加一倍以上或最短作用时间延长一倍以上者可视为
有明显h5响。
附 录 E
乙型肝炎表面抗原破坏试验
(补 充 件 )
El 内容提要
乙型 肝 炎 表面抗原(HBsAg)破坏试验是以HB.Ag的抗原活性为间接标志，评价消毒因子对乙型肝
炎病毒(HBV)灭活能力的试验方法。
适 用于 评 价化学消毒剂、紫外线对HBV的消毒效果
E2
E2.1
E2. 2
E2.3
E2.4
0.95
E2. 5
E3
试剂
小牛 血清(56C , 30 min灭活)。
o.O lmol/L 磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2 ^-7.4 ),
纯化HBsAg(1.Omg/m1)
固相放射免疫分析法试剂，要求特异性100%，精密性CV<15%，灵敏度簇1.On g/mL,线性;>
酶联免疫吸附法试剂，要求特异性100%，精密性CV< 15%，灵敏度(3.2n g/mL，线性:>。.95,
器材
E3. 1
E3.2
EM
E3. 4
E3.5
吸址器:包括试管、吸管(0.111.0 15.
载体(直径1.5c m大小的不锈钢片)
:免疫计数仪。
酶联免疫测定仪。
低温冰箱(一30C~一70 C)
0和10. Oml_4种)和微量进样器(100.OpL)o
EQ HBsAg悬液的配制
E4.1 取0.Ol mol/1.P BS(pH 7.2^ -7.4) 9 .4m 1加入小牛血清0.6m L,配成含6%小牛血清的悬液。再
GB 15981一1995
取该PBS9 .Om L，加入浓度为1.Om g/mL的纯化HBsAg悬液1.O- L，使成含5.4% 小牛血清，HBsAg
浓度为l00pg/mL的试验用HBsAg悬液。
E4.2 将试验用HBsAg悬液1.Om L盛装入容量为1.5M I的玻璃安瓶中，封口，放一30℃一一7O'C冰
箱保存备用。保存期为三个月。
E5 HBsAg的检测方法
E5.1 固相放射免疫分析法(SPRIA) a
E5.2 酶联免疫吸附法(ELISA) o
E6 中和剂选择
在测 定 消 毒剂对HBsAg的破坏效果时，应先选出适宜的中和剂及其使用浓度，再进行破坏试验。
所用 中 和 剂;a.应能有效而及时中止消毒剂的残余作用;b.中和剂及其与消毒剂的中和产物对HBsAg
的抗原活性没有影响，亦不影响检测方法对HBsAg检出的灵敏度。
E6.， 将消毒剂用无菌蒸馏水配成不同浓度，取1.2m L消毒液与0.3mLHBsAg悬液混匀，置20士2C
水浴条件下，作用lOm in,测定该消毒剂lOm in抑制或破坏HBsAg抗原性的最低有效浓度。
E6.2 取消毒剂lOm in抑制或破坏HBsAg抗原性的最低有效浓度与待选中和剂进行试验，试验可按
下列组别进行:a.消毒液。.9m L+HBsAg悬液0.1m Lib.消毒液0.4m L+HBsAg悬液。.1ml作用
lOm in后十含20%小牛血清的中和剂。5mLj c. 先取含20%小牛血清的中和剂1mL与消毒液1mL,混
匀，作用10~ 3 0min，制成中和产物溶液，再行试验。中和产物溶液。.9m L+HBsAg悬液0.1m L;d.含
10%小牛血清的PBSO.9m L+HBsAg悬液0.1m L;e.含10%小牛血清的中和剂0.9m 1.+HBsAg悬液
。.1mL;f.中和产物溶液。.9m L+PBSO.1m L.经检测只有在c,d,e组HBsAg活性的测定值相近(相差
10%以「)并都明显多于b组，a组HBsAg活性不能检出或检出活性明显少于b组，f组阴性对照正常，
方可证明所选中和剂及其使用剂量是适宜的。
E6.3 进行消毒试验时，依据消毒剂与中和剂等当量中和原则，适当调整中和剂的用量。再次按E6.2步
骤测定中和效果后，方可进行抗原性破坏试验。
E7 破坏试验方法
E7门悬液法
悬液 法 指 将HBsAg在悬液中与消毒剂相互作用并进行抗原性破坏效果观察的试验方法。
E7.1门HBsAg悬液的浓度为检测试剂灵敏度的10‘倍。如检测试剂的灵敏度为lng/mL,H BsAg的
浓度应为l0ug/mL,
E7.1.2 取含5%小牛血清的PBS2.7m L加到含。.3mL浓度为100pg/mL的HBsAg悬液中，混匀。
E7.1.3 取小牛血清20mL加到含80mL灭菌的中和剂溶液中，混匀。
E7.1.4 破坏试验:将预定消毒液浓度1.25倍的消毒液与HBsAg悬液按4:1比例混合，混合液容量
不少于1.5m L。然后置20士2℃水浴条件下，作用达规定时间，即刻取。.3mL混合液与等体积含20%小
牛血清的中和剂混匀，作用10-30min，取样测定残留HBsAg的活性，每一样本平行测定2份，每份
0. 1mL，取其平均值，判定破坏效果。每种消毒剂观察3个浓度，每一浓度观察4个作用时间。试验重复
5次。
E7.1.5 阳性对照:取含20%小牛血清的中和剂1mL，加到含1mL试验用消毒液的试管中混匀，作用
10^3 0min，制成中和产物溶液。取该中和产物溶液。.9mL加人试验浓度的HBsAg悬液0.1m L取样检
侧，每一样本检测3份，每份。.1mL，取其平均值为阳性对照值。
E7.1.6 阴性对照:取含20 小牛血清的中和剂1mL加到含1mL试验用消毒液的试管中，混匀，作用
、。一30min，取样检测，每一样本检测3份，每份。.1mL取其平均值为阴性对照值。
GB 15981一1995
应 注 意 阴性对照不能用试剂盒的阴性对照样本。
E7.2 载体法
载体 法 指 将在载体表面的HBsAg与消毒因子相互作用，并进行抗原性破坏效果观察的试验方法
E7.2.1 HBsAg载体的制备
E7.2门门载体为直径1. 5c-大小的不锈钢片，经洗涤剂煮沸洗涤脱脂、压力蒸汽灭菌备用。
E7.2-1-2 HBsAg悬液的浓度为检测方法灵敏度的5X10‘倍。如灵敏度为1ng /mL, HBsAg的浓度应
为50pg/ml。
E7.2门.3 HBsAg的污染方法为滴染法。滴染时，将灭菌载体平铺于无菌平皿内，用微量进样器吸取
HBsAg悬液，滴注于载体中央，每个载体20川。然后用L型白金丝将悬液涂布均匀，放37 C培养箱40
一60min，待悬液干燥后进行抗原性破坏试验。
E7.2. 2 杭原性破坏试验
取污 染 HBsAg的载体，平放于无菌平皿内，用吸管吸取预定浓度的消毒液50ML，滴注于载体中央，
迅即涂匀，使整个载体均匀受药。每2片一组，置20士2'C水浴中，作用至规定时间后，用无菌镊子将载
体移入含1.OM L10%小牛血清的中和剂试管中。作用10-30min,敲打振荡200次，取样检测残留HBsAg
的活性，每一样本取样2份，每份。.1mL，取其平均值，判定抗原性的破坏效果每种消毒剂观察3
个浓度，每个浓度观察4个作用时间。试验重复5次。
在观 察 紫 外线破坏HBsAg的效果时，将污染载体直接置作用因子下，作用至规定剂量后将载体移
入含1.0.1-10%小牛血清PBS的试管中，敲打振荡200次，取样检测残留HBsAg活性，每一样本取样2
份，每份。.lml，取其均值，判定破坏效果。试验重复5次。
E7.2-3 阳性对照
在观 察 消 毒剂破坏HBsAg效果时，取50pL试验用消毒液加到含1.Om L10%小牛血清中和剂的试
管中，作用10^-30min，制成中和产物溶液取该中和产物溶液1. OmL加到大试管中，然后将滴染HB-
,Ag的载体移入，敲打振荡200次，每一样本检测3份，每份。.1mL，取其平均值为阳性对照值。
在观 察 紫 外线破坏HBsAg效果时，将污染HBsAg的载体直接移入含1.Om L1 0%小牛血清的PBS
(pH 7.2^7.4)的试管中，敲打振荡200次，每一样本检测3份，每份0. 1mL.取其平均值为阳性对照
值。
E7.2-4 阴性对照
在观 察 消 毒剂破坏HBsAg效果时，取50pL消毒液加到含1mL1 0%小牛血清中和剂试管中，作用
10-30min，取样检测，每一样本检测3份，每份。.1mL。取其平均值为阴性对照值。
在观 察 紫 外线破坏HBsAg时，阴性对照则为含10%小牛血清的PBS(pH7.2- 7.4 )。每一样本检测
3份，每份。1mL，取其平均值为阴性对照值。
应 注 意 阴性对照不能用试剂盒的阴性对照样本。
E8 破坏效果判定
以 S/ NG 2.1 作为HBsAg抗原性破坏合格标准。其中S是消毒因子作用后被检样品或阳性对照样
品平均每分钟脉冲数(epm)值或光密度(OD)值。N是试验中阴性对照样品平均cpm值或OD值。
附加说明:
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所负责起草。
本标准上要起草人袁洽助、王太星、顾健。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。
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李延
发布于2007-07-20 10:58:35
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只会这么发，各位指教一下，用附件的形式如何发？
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yuanzhou
发布于2007-07-20 13:19:53
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多谢楼上，资料非常好！
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nglian
发布于2007-07-20 13:24:47
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QUOTE:
原帖由 李延 于 2007-7-20 10:58 发表
发新贴或者点帖子上面的“回复”有上传附件的``
只会这么发，各位指教一下，用附件的形式如何发？
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李延
发布于2007-07-20 14:36:44
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回复 #16 nglian 的帖子
试过了，完成后是与服务器连不上，传不了
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李延
发布于2007-07-20 17:14:50
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GB15981-1995灭菌和消毒效果评价标准
GB15981-1995灭菌和消毒效果评价标准
GB15981-1995灭菌和消毒效果评价标准.pdf
(2007-07-20 17:14:50, Size: 415 KB, Downloads: 2)
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lsj5520
发布于2007-07-20 22:25:35
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QUOTE:
原帖由 yiyunting 于 2007-7-19 09:15 发表
我今天听一个取得实验室认可的朋友说,方法和上面的一样.高压锅杀菌效果验证,不会那么复杂吧.
我们就是用化学指示卡，放到灭菌锅内，最后只是颜色能达到标准黑色就可以了
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yuanzhou
发布于2007-07-21 00:10:58
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在广东地区，出口食品生产企业实验室认可一般由当地的检验检疫部门进行考核，需要指示卡进行验证并有相关的作业规程与验证结果记录。要用到目标菌并经接种培养的话那就更全面了，如果没能力实际运行的企业，至少实验室负责人了解并能回答有关要求。
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林夕发布于2007-07-21 20:30:14
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18#的这个标准咱们论坛已经有了
http://www.foodmate.net/standard/sort/3/7084.html
谢谢李延对论坛的支持
[ 本帖最后由 林夕 于 2007-7-21 20:31 编辑 ]
