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蛋白质的变性

上一篇 / 下一篇  2009-12-15 16:38:55

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蛋白质变性既有物理变化,也有化学变化:

蛋白质是由多种氨基酸通过肽键构成的高分子化合物,在蛋白质分子中各氨基酸的结合顺序称为一级结构:蛋白质的同一多肽链中的氨基和酰基之间可以形成氢键,使得这一多肽链具有一定的构象,这些称为蛋白质的二级结构;多肽链之间又可互相扭曲折叠起来构成特定形状的排列称为三级结构,三级结构是与二硫键,氢键等联系着的。

变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果。

能使蛋白质变性的化学方法有加强酸,强碱,重金属盐,尿素,乙醇,丙酮等;

能使蛋白质变性的物理方法有加热,紫外线照射,剧烈振荡等。 重金属盐使蛋白质变性,是因为重金属阳离子可以和蛋白质中游离的羧基形成不溶性的盐,在变性过程中有化学键的断裂和生成,因此是一个化学变化。
强酸、强碱使蛋白质变性,是因为强酸、强碱可以使蛋白质中的氢键断裂。也可以和游离的氨基或羧基形成盐,在变化过程中也有化学键的断裂和生成,因此,可以看作是一个化学变化。

尿素、乙醇、丙酮等,它们可以提供自己的羟基或羰基上的氢或氧去形成氢键,从而破坏了蛋白质中原有的氢键,使蛋白质变性。但氢键不是化学键,因此在变化过程中没有化学键的断裂和生成,所以是一个物理变化。


加热、紫外线照射,剧烈振荡等物理方法使蛋白质变性,主要是破坏厂蛋白质分子中的氢键,在变化过程中也没有化学键的断裂和生成,没有新物质尘成,因此是物理变化。否则,鸡蛋煮熟后就不是蛋白质了。


从以上分析可以看出,蛋白质的变性既有物理变化,也有化学变化。但蛋白质的变性是很复杂的,要判断变性是物理变化还是化学变化,要视具体情况而定。如果有化学键的断裂和生成就是化学变化;如果没有化学键的断裂和生成就是物理变化。


天然蛋白质的严密结构在某些物理或化学因素作用下,其特定的空间结构被破坏,从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失,如酶失去催化活力,激素丧失活性称之为蛋白质的变性作用(denaturation)。变性蛋白质只有空间构象的破坏,一般认为蛋白质变性本质是次级键,二硫键的破坏,并不涉及一级结构的变化。   


变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低,同时蛋白质的粘度增加,结晶性破坏,生物学活性丧失,易被蛋白酶分解。

引起蛋白质变性的原因可分为物理和化学因素两类。物理因素可以是加热、加压、脱水、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波的作用等;化学因素有强酸、强碱、尿素、重金属盐、十二烷基磺酸钠(SDS)等。在临床医学上,变性因素常被应用于消毒及灭菌。

反之,注意防止蛋白质变性就能有效地保存蛋白质制剂。

变性并非是不可逆的变化,当变性程度较轻时,如去除变性因素,有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能,变性的可逆变化称为复性。例如,前述的核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键。在β 巯基乙醇和8M尿素作用下,发生变性,失去生物学活性,变性后如经过透析去除尿素,β 巯基乙醇,并设法使疏基氧化成二硫键,酶蛋白又可恢复其原来的构象,生物学活性也几乎全部恢复,此称变性核糖核酸酶的复性。
许多蛋白质变性时被破坏严重,不能恢复,称为不可逆性变性


TAG: 蛋白质 变性

肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-15 16:50:20

根据溶解度不同,可将蛋白质分为以下几类:
(一)清蛋白
清蛋白albumin又称白蛋白,分子量较小,溶于水、中性盐类、稀酸和稀碱,可被饱和硫酸铵沉淀。清蛋白在自然界分布广泛,如小麦种子中的麦清蛋白、血液中的血清清蛋白和鸡蛋中的卵清蛋白等都属于清蛋白。
(二) 球蛋白
球蛋白globulins一般不溶于水而溶于稀盐溶液、稀酸或稀碱溶液,可被半饱和的硫酸铵沉淀。球蛋白在生物界广泛存在并具有重要的生物功能。大豆种子中的豆球蛋白、血液中的血清球蛋白、肌肉中的肌球蛋白以及免疫球蛋白都属于这一类。
(三)组蛋白
组蛋白histones可溶于水或稀酸。组蛋白是染色体的结构蛋白,含有丰富的精氨酸和赖氨酸,所以是一类碱性蛋白质。
(四)精蛋白
精蛋白protamines易溶于水或稀酸,是一类分子量较小结构简单的蛋白质。精蛋白含有较多的碱性氨基酸,缺少色氨酸和酪氨酸,所以是一类碱性蛋白质。精蛋白存在于成熟的精细胞中,与DNA结合在一起,如鱼精蛋白。
(五)醇溶蛋白
醇溶蛋白prolamines不溶于水和盐溶液,溶于70%80%的乙醇,多存在于禾本科作物的种子中,如玉米醇溶蛋白、小麦醇溶蛋白。
(六)谷蛋白类
谷蛋白glutelins不溶于水、稀盐溶液,溶于稀酸和稀碱。谷蛋白存在于植物种子中,如水稻种子中的稻谷蛋白和小麦种子中的麦谷蛋白等。
(七)硬蛋白类
硬蛋白(scleroproteins)不溶于水、盐溶液、稀酸、稀碱,主要存在于皮肤、毛发、指甲中,起支持和保护作用,如角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、丝蛋白等。


单纯蛋白质按溶解度分类
蛋白质类别举 例溶 解 度热凝固60~80℃
清蛋白(blbumin)血浆清蛋白、乳清蛋白 溶于水和中性盐溶液
不溶于饱和硫酸铵溶液
球蛋白(globulin)免疫球蛋白、纤维蛋白原
卵球蛋白
溶于稀中性盐溶液
不溶于半饱和硫酸盐溶液
谷蛋白(glutelin)粘蛋白、麦谷蛋白溶于稀酸、稀碱中
不溶于水、中性盐及乙醇中
不凝
硬蛋白(sclerprotein)胶原蛋白、弹性蛋白
角蛋白
不溶于水、中性盐溶液
稀酸、稀碱和一般有机溶剂中
不凝
组蛋白(histone)组蛋白H1溶于水、稀酸、稀碱
不溶于稀氨水中
不凝
精蛋白(spermatine)鱼精蛋白溶于水,稀酸/碱和稀氨水中不凝
醇溶谷蛋白(prolamine)醇溶谷/玉米蛋白溶于70~80%乙醇中
不溶于水、中性盐溶液中
不凝
 
 

[ 本帖最后由 轻舟 于 2009-12-15 16:52 编辑 ]
肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-15 17:11:57
变性蛋白质特点是:生物学活性丧失,更易被蛋白酶催化水解,溶解度降低
1.
会生物活性丧失
变性蛋白质的主要特征 ,如酶不再具有催化活性.
2.
溶解度明显下降,易沉淀

球状蛋白质变性后,空间结构破坏,多肽链伸展 形成随机卷曲的无规线团,隐藏在分子内部的疏水基团 暴露,肽链伸展并相互缠绕聚集,原有的亲水性丧失,
3.
溶解度下降。

变性蛋白质因疏水基团暴露,易沉淀。尤其在pH接近 其等电点的溶液中发生聚集而沉淀。但是在离等电点很远 pH环境中或有尿素、胍等变性剂共存时,由于电荷的排 斥,可不发生沉淀。
4.
溶液粘度增大,扩散速度降低

粘度和扩散速度与分子量大小和分子结构的不对称程度相关,分子量愈大、不对称程度愈大的蛋白质,粘度愈大,扩散速度愈小。 蛋白质变性后,原来有秩序的空间结构转变为无秩序松散的伸展状态,分子的不对称程度加大,因而溶液的粘度亦增 大。扩散速度下降。
5.
易被蛋白质水解,旋光度、紫外、红外吸光光谱改变等

肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-15 17:49:25

清蛋白

溶于水且遇热凝固的一种球形单纯蛋白。

在自然界中分布最广,几乎存在于所有动植物中。如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白、肌白蛋白、麦白蛋白、豆白蛋白等都属于此类。常用作培养基成分。也可用有人造香肠、汤品和炖品中作粘接剂。

  是一类不被50%饱和度的硫酸铵溶液沉淀的球状蛋白质。存在于动物组织、体液和某些植物的种子中。其分子量较低,溶于水,易结晶。在中性溶液中加热即沉淀或凝固。其重要代表是血清蛋白、乳清蛋白、卵清蛋白、麦清蛋白、豆清蛋白及有毒的蓖麻蛋白

球蛋白

 能被50%饱和度硫酸铵溶液沉淀的单纯蛋白质。

不溶于纯水,易溶于稀盐水,加热即沉淀或凝固。存在于所有动植物细胞和体液中。最熟知的球蛋白是人血清球蛋白,可经电泳法分成α1-α2-β1-β2-γ-球蛋白,有免疫性。此外还有乳球蛋白、肌球蛋白等。植物种籽中的蛋白质多属此类。球蛋白一般不溶于水,但加少量盐、酸或碱后可以溶解。


肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-15 18:00:06
肌肉组织的蛋白质,主要可区分为三大类:

    1.肌原纤维蛋白质(Myofibrillarproteins)

      肌原纤维蛋白质系为构成负责肌肉收缩之肌原纤维的蛋白质,占肌肉白质的50~55%。肌原纤维蛋白质不溶於水,仅溶於高盐溶液;其种类包括肌球蛋白,肌动蛋白……等等至少15种以上蛋白质。

    2.肌浆蛋白质(Sarcoplasmicproteins)

     肌浆蛋白质系位於肌肉细胞质中,与能量代谢功能有关之蛋白质,占肌肉蛋白质的30~35%。肌浆蛋白质之种类有100种以上,但多可溶於中性pH值的低盐溶液。

    3.基质蛋白质(Stromaproteins)

    基质蛋白质系构成肌肉细胞中结缔组织的蛋白质,占肌肉蛋白质的10~15%。基质蛋白质不溶於中性水溶液,成分以胶原蛋白(Collagen)及弹性蛋白(Elastin)为主。

     上述三种蛋白质中,肌浆蛋白质所含肌血红素(Myoglobin)与食肉色泽有关;基质蛋白质则与食肉嫩度关系密切;肌原纤维蛋白质之功能特性则与食肉加工息息相关。
肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-15 18:08:12
从鸡肉中提取肌原纤维蛋白的方法
一种从鸡肉中提取肌原纤维蛋白的方法,其特征是,包括下述步骤:
(1)将鸡肉切碎,加入pH值为6.0-7.0的低离子强度提取液,使鸡肉中在低离子强度下可溶的杂质蛋白质溶出,均质离心,去掉鸡肉中的杂质及杂质蛋白质,得到含有肌原纤维蛋白的沉淀物;其中低离子强度提取液为乙二胺四乙酸二钠盐与浓度为0.1~0.2mol/L的KCL溶液按质量体积比为1∶500制成溶液,之后用硼酸-硼酸钠缓冲液调节溶液的pH值为6.0~7.0得到;
(2)在上述含有肌原纤维蛋白的沉淀物中加入pH值为6.0-7.0的高离子强度提取液,使鸡肉中的肌原纤维蛋白溶出得到粗制的肌原纤维蛋白悬浊液,均质离心,将分离出的肌原纤维蛋白沉淀物,通过多次加入高离子强度提取液多次离心,去掉鸡肉中的杂质蛋白及其它杂质,收集悬浊液离心后的沉淀即为肌原纤维蛋白;所述高离子强度提取液为乙二胺四乙酸二钠盐与浓度为0.4~0.6mol/L的KCL溶液按质量体积比为1∶500制成溶液,之后用硼酸-硼酸钠缓冲液调节溶液的pH值为6.0~7.0得到;
  (3)将上述制得的肌原纤维蛋白中加入上述高离子强度提取液制成溶液在室温下透析,去掉溶液中混有的小分子量的离子,收集肌原纤维蛋白溶液,之后,将经过透析的肌原纤维蛋白溶液冷冻干燥即得棉絮状的肌原纤维蛋白。
shimingyun的个人空间 川东顽石 发布于2009-12-15 18:13:10
呵呵,轻斑辛苦了。
谢谢分享!
whhp1998的个人空间 whhp1998 发布于2009-12-15 19:15:35
学习了,谢谢分享!!!!!!!
whhp1998的个人空间 whhp1998 发布于2009-12-15 19:21:42
好像还没有完,期待!!!!!
肉制品加工者驿站 轻舟 发布于2009-12-16 14:10:42
肌动球蛋白actomyosin
肌肉收缩蛋白的肌动蛋白和肌球蛋白的复合体。一般以1∶3的重量比混合被用于玻璃管内的实验。在高的离子强度(0.6M KCl)下,肌球蛋白呈箭尾型结合于F肌动蛋白的细丝。ATP可使肌球蛋白从F肌动蛋白解离下来。
随着冻藏时间的延长,肌动球蛋白发生了聚集而变性。表面疏水性随着冻藏时间的延长而增加,Ca2+-ATP 酶活性下降、巯基和盐溶性蛋白质含量等逐渐降低。冻藏引起了蛋白质的变性。
dw_1975的个人空间 dw_1975 发布于2009-12-16 15:08:47
学习了,期待..........
食品天空 食品工程1981 发布于2009-12-17 08:19:42
谢谢楼主的信息,受教了
yunfei1983的个人空间 yunfei1983 发布于2009-12-17 09:57:35
不错的资料,谢谢楼主分享了
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